血清外泌体中hsa-miR-335-5p通过靶向MEF2D调控滋养层功能：子痫前期发病机制的新靶点

推荐 为解决子痫前期（PE）缺乏有效早期诊断标志物及治疗靶点的问题，河南人民医院研究人员利用微流控芯片技术结合高通量测序，发现PE患者血清外泌体中hsa-miR-335-5p显著上调，通过抑制滋养层细胞增殖、侵袭并促进凋亡，最终导致胎盘结构破坏和胎儿生长受限。该研究揭示hsa-miR-335-5p通过靶向MEF2D调控滋养层功能，为PE的早期诊断和治疗提供了新策略。

　　

论文解读
子痫前期（Preeclampsia, PE）作为妊娠期特有的高血压并发症，全球发病率高达2%-8%，是导致孕产妇和围产期死亡的主要原因之一^[2-4]。其病理机制涉及内皮功能障碍、免疫失调及遗传因素，但具体分子机制尚未明确^[5-7]。目前临床治疗依赖降压药物和提前终止妊娠，存在母胎健康风险^[8]。由于缺乏无创早期诊断标志物，PE的预防和治疗面临重大挑战^[10,11]。

为探索PE的分子机制，河南人民医院的研究团队采用微流控芯片技术结合高通量测序，系统分析了正常妊娠和PE患者血清外泌体中的miRNA差异表达谱。研究发现，hsa-miR-335-5p在PE患者外泌体中显著上调，并通过体外细胞实验和动物模型验证其功能。

研究团队首先利用SU-8光刻技术和PDMS铸造工艺制备免疫亲和微流控芯片（Exosome Separation Chip, ESC），通过表面修饰优化外泌体捕获效率^[22]。随后采用高通量测序结合Lasso回归和SVM-RFE算法，从600余种胎盘相关miRNA中筛选出关键候选分子。实验结果显示，hsa-miR-335-5p在PE患者血清外泌体中的表达量较对照组升高2.3倍（P<0.01）。

功能验证实验表明，过表达hsa-miR-335-5p显著抑制滋养层细胞的增殖（Ki67阳性率下降40%）和侵袭能力（Transwell迁移细胞数减少55%），并在缺氧条件下（5% O₂）加速细胞凋亡（Caspase-3活性增加3倍）。动物实验进一步证实，过表达hsa-miR-335-5p的大鼠出现胎盘结构紊乱和胎儿体重降低（P<0.05）。

机制研究发现，MEF2D（Myocyte Enhancer Factor 2D）是hsa-miR-335-5p的直接靶基因。双荧光素酶报告实验证实，hsa-miR-335-5p通过结合MEF2D mRNA的3'UTR区域抑制其表达。MEF2D的缺失导致滋养层细胞功能异常，而外源性过表达MEF2D可部分逆转hsa-miR-335-5p的抑制作用。

研究结论表明，hsa-miR-335-5p通过靶向MEF2D调控滋养层功能，是PE发病的关键分子机制。该发现不仅深化了对PE病理机制的理解，更为开发无创诊断标志物和治疗靶点提供了理论依据。论文指出，hsa-miR-335-5p的血清水平可作为PE早期筛查指标，而靶向抑制该miRNA或恢复MEF2D表达可能成为新型治疗策略。

研究采用的关键技术包括：

1. 微流控芯片技术：基于SU-8光刻和PDMS铸造制备免疫亲和芯片，结合表面修饰优化外泌体捕获效率；
2. 高通量测序：分析正常妊娠和PE患者血清外泌体miRNA表达谱；
3. 生物信息学分析：通过Lasso回归和SVM-RFE算法筛选差异表达miRNA；
4. 功能验证实验：体外细胞模型（增殖、侵袭、凋亡检测）和动物模型（胎盘形态及胎儿体重评估）；
5. 分子机制研究：双荧光素酶报告实验验证miRNA-mRNA靶向关系。

该研究为PE的早期诊断和治疗开辟了新方向，其成果发表于《Cellular Signalling》。研究团队强调，未来需进一步验证hsa-miR-335-5p在不同种族PE患者中的普适性，并探索其作为治疗靶点的安全性与有效性。