AAV8介导的Sox4基因沉默为Alagille综合征肝表型提供长效缓解新策略

本研究针对Alagille综合征(ALGS)患者胆汁管缺乏导致的严重胆汁淤积表型，通过AAV8载体介导的Sox4基因沉默技术，在Jag1杂合缺失小鼠模型中实现长期肝表型改善。研究发现Sox4/SOX4在ALGS患者及模型小鼠肝脏中异常高表达，通过单细胞RNA测序(scRNA-Seq)揭示Sox4-Sox9共表达中间肝胆细胞群的关键作用。该研究为ALGS等胆管缺乏疾病提供了首个机制性治疗靶点，论文发表于《Gastroenterology》。

　　

背景与挑战
Alagille综合征(ALGS)是一种由JAG1/NOTCH2突变引发的常染色体显性遗传病，其特征性胆汁管缺乏可导致进行性肝损伤，最终需肝移植治疗。尽管Notch信号通路在胆管发育中的作用已被确认，但针对ALGS的机制性治疗始终空白。现有治疗仅能缓解症状，无法逆转胆管发育缺陷。更棘手的是，临床观察到部分ALGS患者即使接受肝移植后仍会出现胆管病变复发，这提示需要开发靶向胆管发育关键调控因子的根本性治疗策略。

研究设计与技术路线
由国际研究团队开展的本研究采用多维度策略：首先利用Jag1杂合缺失（Jag1^+/-）小鼠模型，结合条件性Sox9敲除系统，通过遗传学手段验证Sox4的病理作用；继而采用AAV8（腺相关病毒8型）载体搭载TBG（甲状腺素结合球蛋白）启动子驱动Sox4-shRNA，分别在出生后第1天(P1)和第15天(P15)进行干预；通过肝组织病理学、胆管树墨水灌注、血清生化、RNAscope原位杂交等技术评估表型改善；结合小鼠scRNA-Seq和人类肝脏bulk RNA-Seq数据交叉验证靶点。

关键发现

1. Sox4-Sox9调控轴的确立
   条件性敲除单拷贝Sox4可显著改善Jag1^+/-小鼠的胆管减少和肝纤维化表型，但该效应在Sox9单等位基因缺失背景下消失，证实Sox4的作用具有Sox9依赖性。

2. 临床相关性验证
   RNAscope显示ALGS患者肝脏中SOX4表达较正常组织升高2.3倍，且与疾病严重程度正相关。人类肝脏RNA-Seq数据再分析发现，SOX4在婴儿期ALGS患者中表达峰值与胆管畸形发生窗口期吻合。

3. 细胞亚群发现
   scRNA-Seq揭示Jag1^+/-肝脏中出现独特的Sox4⁺Sox9⁺中间肝胆细胞群，该群体在正常肝脏中占比<1%，而在突变体中扩张至7.8%，提示其可能阻碍胆管前体细胞正常分化。

4. AAV8治疗窗口期
   P1期单次注射AAV8-TBG-Sox4-shRNA可使血清胆红素水平维持正常达6个月，胆管密度恢复至野生型85%。值得注意的是，P15期干预仍能促使5-8%的转导细胞整合入胆管结构，并改善已形成的肝坏死灶。

转化医学意义
该研究首次证明：① Sox4是Notch信号下游调控胆管发育的"分子刹车"；② 出生后AAV介导的基因沉默可逆转发育缺陷，突破传统认为的"胆管发育关键期不可逆"理论；③ 采用TBG启动子实现肝特异性靶向，避免全身副作用。研究为ALGS提供了首个进入临床转化阶段的候选治疗方案，其AAV8载体设计已获得专利保护。鉴于Sox4在多种纤维化疾病中的共性作用，该策略有望拓展至其他胆管闭锁性疾病治疗领域。