泰国南部库蠓DNA条形码鉴定及利什曼原虫与其他锥虫科寄生虫的检测研究

为解决库蠓（Culicoides）作为潜在病媒在泰国南部利什曼病传播中的作用问题，研究人员通过形态学与DNA条形码（COI基因）整合分类法，鉴定了25种库蠓，并首次在库蠓中检测到利什曼原虫（Leishmania martiniquensis和L. orientalis）的共循环感染。研究揭示了库蠓的宿主多样性（牛、犬、鸡及混合血源）与病原体传播风险，为热带地区人畜共患病防控提供了关键依据。

　　

在热带地区，利什曼病（Leishmaniasis）作为一种由利什曼原虫（Leishmania）引起的虫媒疾病，长期威胁着人类和动物的健康。传统上，沙蝇（Phlebotomine sand flies）被认为是其主要传播媒介，但近年来越来越多的证据表明，库蠓（Culicoides）可能同样扮演着重要角色。泰国南部作为利什曼病的新兴流行区，病例数持续上升，然而关于库蠓作为潜在病媒的研究仍存在空白。尤其是一种名为Mundinia亚属的利什曼原虫（包括L. martiniquensis和L. orientalis），已被证实可在库蠓体内完成发育周期并通过叮咬传播，但其自然传播循环尚未完全阐明。此外，库蠓物种的复杂分类学特征和潜在的隐存种（cryptic species）问题，进一步增加了研究的挑战性。

针对这些问题，朱拉隆功大学医学院的研究团队在泰国南部的三个省份（那空是贪玛叻府、素叻他尼府和甲米府）开展了系统性调查。他们通过形态学鉴定结合DNA条形码技术，揭示了库蠓的物种多样性及其与利什曼原虫传播的潜在关联。相关成果发表在《Parasites》上，为热带病防控提供了新的科学依据。

研究团队采用了多项关键技术：首先利用CDC紫外光诱捕器采集库蠓样本，通过翅斑形态进行初步分类；其次采用非破坏性DNA提取法保留标本完整性，基于COI基因进行分子鉴定；此外运用ASAP、TCS和PTP三种物种界定算法分析隐存种；最后通过ITS1和SSU rRNA基因PCR检测利什曼原虫及其他锥虫科寄生虫，并结合血餐分析揭示宿主偏好性。

物种组成与DNA条形码分析
研究共捕获875只雌性库蠓，鉴定出25个物种，分属5个亚属和4个物种群。其中C. peregrinus（30.03%）、C. subgenus Trithecoides（27.94%）和C. huffi（72.16%）为优势种。COI基因测序成功率达82.20%，系统发育分析显示C. huffi和C. palpifer存在显著遗传分化（K2P距离>18%），物种界定算法进一步证实了6个物种存在隐存种复合体。值得注意的是，部分样本因数据库信息缺失未能鉴定到种级，提示可能存在新物种。

利什曼原虫感染检测
在716只非吸血库蠓中，6.42%检测到利什曼原虫DNA。那空是贪玛叻府的Ron Phibun地区呈现L. martiniquensis（3.29%）与L. orientalis（5.98%）共循环现象，主要存在于C. peregrinus和C. oxystoma中；而素叻他尼府的C. huffi则单独携带L. martiniquensis（6.18%）。单倍型网络分析显示两种病原体均具有高单倍型多样性（Hd>0.7）和低核苷酸多样性（π<0.02），符合近期种群扩张特征。

血餐分析与宿主偏好
对159只吸血库蠓的检测发现，94.90%以牛为食源，但C. oxystoma、C. orientalis和C. sumatrae存在人-牛混合血餐。这种多宿主吸血行为显著增加了人畜共患病传播风险。

其他锥虫科寄生虫
1.82%的库蠓携带单宿主锥虫Crithidia sp.，其中C. peregrinus检出率最高（3.29%），甲米府的C. subgenus Trithecoides则首次发现C. brevicula感染。

该研究首次系统证实了泰国南部库蠓作为利什曼原虫传播媒介的潜力，其重要意义体现在三方面：一是通过整合分类学解决了隐存种鉴定难题，为病媒监测提供新方法；二是揭示了L. martiniquensis与L. orientalis的共循环模式，解释了临床病例的病原复杂性；三是发现库蠓的多宿主吸血习性，为制定针对性防控策略（如牲畜管理）提供了依据。未来需进一步验证库蠓的媒介效能，并探索季节性变化对传播动态的影响。这项研究不仅填补了东南亚地区虫媒病研究的空白，也为全球热带病防控体系完善提供了关键数据支撑。