iRGD稳定修饰增强NY-ESO-1 TCR-T在实体瘤中的浸润能力并与PD-1阻断产生协同效应

为解决T细胞受体修饰T细胞（TCR-T）疗法在实体瘤治疗中面临的浸润不足和免疫抑制信号限制疗效两大难题，南京大学医学院肿瘤中心团队通过聚乙二醇-磷脂（PEG-lipids）将穿膜肽iRGD稳定修饰于NY-ESO-1特异性TCR-T表面，显著提升T细胞靶向渗透能力，并联合PD-1阻断解除免疫抑制。研究表明，iRGD-NY-ESO-1 TCR-T可高效识别HLA-A*02:01限制性NY-ESO-1抗原，在黑色素瘤模型中实现协同抗肿瘤效应，为难治性实体瘤提供新策略。

　　

在肿瘤免疫治疗领域，T细胞受体修饰T细胞（TCR-T）疗法虽在血液肿瘤中表现亮眼，却在实体瘤应用中遭遇"双重壁垒"：一方面，致密的细胞外基质和特殊微环境形成物理屏障，导致静脉输注的T细胞仅有不足2%能浸润至肿瘤基质；另一方面，肿瘤细胞和调节性免疫细胞产生的免疫抑制信号，如PD-1/PD-L1通路，严重限制T细胞活性。尤其对于NY-ESO-1这一在滑膜肉瘤、黑色素瘤等高表达的癌睾抗原，现有TCR-T疗法的客观缓解率波动在20%-66%，疗效参差不齐。

南京大学医学院附属鼓楼医院肿瘤中心团队独辟蹊径，将肿瘤靶向穿膜肽iRGD（CRGDK/RGPD/EC）通过DSPE-PEG-iRGD结构锚定于NY-ESO-1特异性TCR-T膜表面。这种创新设计巧妙融合了"抗原特异性识别"与"组织穿透增强"双重优势：iRGD通过RGD基序靶向肿瘤血管内皮细胞高表达的整合素受体（αvβ3/5），经蛋白酶切割后暴露的CendR结构域进一步结合神经纤毛蛋白-1（NRP-1），形成级联穿透效应。

研究采用Sleeping Beauty转座子系统构建NY-ESO-1特异性TCR-T，通过流式细胞术验证转染效率及稳定性；利用近红外成像和免疫组化分析iRGD修饰对T细胞肿瘤归巢的影响；建立A375黑色素瘤小鼠模型评估联合PD-1阻断的协同效应。

NY-ESO-1特异性TCR-T的成功构建
通过引入鼠源化TCR恒定区修饰，研究者获得CD8⁺ T细胞中NY-ESO-1 TCR稳定表达率达36.9%的工程化细胞。体外实验显示，该TCR-T对高表达NY-ESO-1的A375细胞产生特异性杀伤，在效靶比40:1时杀伤率达70%，显著高于低表达抗原的SK-HEP-1细胞组（P<0.0001）。

iRGD稳定修饰增强肿瘤浸润
当DSPE-PEG-iRGD-Cy3浓度达60μg/mL时，可在10⁶个T细胞表面实现荧光标记饱和。体内实验显示，修饰组在输注6小时后肿瘤区域近红外信号即显著增强（P<0.01），48小时时肿瘤内CD3⁺ T细胞数量是对照组的3倍。免疫荧光证实iRGD-NY-ESO-1 TCR-T能均匀渗透至肿瘤核心区域。

协同PD-1阻断的增效机制
联合治疗使肿瘤体积较单用iRGD-TCR-T组再缩小70%（P<0.001）。流式分析发现，联合组肿瘤内T细胞PD-1表达显著降低（P<0.05），但CD4⁺/CD8⁺亚群比例未变，证实PD-1阻断通过逆转T细胞耗竭而非改变亚群分布发挥增效作用。

这项研究开创性地将膜整合iRGD修饰与检查点抑制相结合，突破性地解决了实体瘤免疫治疗中"进得去"和"活得好"两大瓶颈。值得注意的是，即使在缺乏功能性小鼠免疫环境的异种移植模型中，iRGD修饰仍能维持长达22天的抗原特异性T细胞驻留，提示其在人类免疫系统环境中可能具有更强协同效应。未来研究可进一步在HLA-A*02:01转基因小鼠模型中验证该策略，并探索IL-2非依赖型治疗方案。这种模块化设计思路也为其他靶点TCR-T的优化提供了普适性技术框架，标志着实体瘤免疫治疗进入"精准渗透+协同增效"的新阶段。