胃癌中液-液相分离相关预后生物标志物的开发与验证研究

本研究针对胃癌(GC)预后预测难题，通过生物信息学分析结合实验验证，首次鉴定了液-液相分离(LLPS)相关的分子亚型及三个关键预后标志物(DACT1/PTPN6/GLE1)。研究揭示了LLPS在GC中的调控机制，构建了风险评分模型(AUC达0.686)，并通过孟德尔随机化(MR)证实DACT1与GC风险的因果关系，为精准治疗提供新靶点。

　　

胃癌是全球第四大癌症死因，五年生存率仅30%，晚期患者治疗选择有限。当前临床缺乏有效的预后预测工具，而液-液相分离(LLPS)作为新兴的生物学现象，在肿瘤发生中扮演关键角色却尚未在GC领域深入探索。LLPS通过形成无膜细胞器调控基因表达，其异常与多种癌症相关，但GC中LLPS相关分子机制和临床应用价值仍是空白。

浙江某研究机构团队在《Discover Oncology》发表研究，首次系统揭示了GC中LLPS相关分子亚型及预后标志物。通过整合TCGA-STAD和GEO数据库(GSE54129/GSE84437)，结合实验验证，发现三个LLPS亚型中，亚型2患者预后最差且富含M2巨噬细胞；鉴定了DACT1(低表达促癌)、PTPN6/GLE1(高表达促癌)三个核心标志物，构建的风险模型在训练集(AUC 0.645)和验证集(AUC 0.686)均表现优异。孟德尔随机化首次证实DACT1与GC风险的因果关联(IVW OR=1.149)，qRT-PCR验证了标志物在GC细胞系的差异表达。

关键技术包括：1) 基于PhaSepDB数据库筛选403个LLPS基因；2) 对TCGA和GEO的GC队列进行差异表达分析；3) 共识聚类(ConsensusClusterPlus)鉴定分子亚型；4) CIBERSORT算法分析免疫浸润；5) LASSO回归构建预后模型；6) 孟德尔随机化(MR)分析因果关联；7) qRT-PCR验证细胞系(BGC-823/MKN-45/MGC-803)表达。

研究结果：

1. LLPS相关基因鉴定
   通过差异分析筛选62个GC相关LLPS基因，包括Wnt通路抑制因子DACT1和mRNA输出调控因子GLE1。

2. 分子亚型发现
   共识聚类划分三个亚型，亚型2总体生存(OS)显著较差(P=0.00024)，伴随PD-1/CTLA-4等免疫检查点异常表达，且M2巨噬细胞浸润增加。

3. 预后模型构建
   LASSO回归筛选出DACT1(风险系数+0.0473)、PTPN6(-0.0869)、GLE1(-0.0785)，低风险组5年生存率提高2倍。模型在年龄/性别分层中保持稳健(男性AUC 0.71)。

4. MR因果验证
   DACT1表达升高使GC风险增加14.9%(IVW P=0.006)，而PTPN6/GLE1未显示因果关联。

5. 实验验证
   qRT-PCR显示GC细胞中PTPN6/GLE1表达较正常细胞(GES-1)上调3-5倍(P<0.01)，DACT1下调50%。

结论与意义：
该研究开创性地建立了LLPS在GC中的分子分型体系，首次报道DACT1/PTPN6/GLE1可作为LLPS相关预后标志物。其中DACT1通过β-catenin稳定性调控促进GC进展的机制，为靶向治疗提供新思路。模型整合了免疫微环境特征(如M2巨噬细胞)，有助于个性化免疫治疗策略制定。局限性在于未开展蛋白水平验证和体内实验，未来需扩大样本验证模型临床适用性。研究成果为GC精准医疗提供了理论依据和潜在干预靶点。