橙皮苷与CK2抑制剂DRB通过调控淀粉样通路和凋亡机制对Aβ1-42诱导的神经毒性具有协同神经保护作用

为解决阿尔茨海默病(AD)缺乏有效治疗手段的问题，土耳其埃尔吉耶斯大学的研究团队通过建立SH-SY5Y细胞分化模型，首次对比评估了柑橘类黄酮橙皮苷(Hesperidin)与CK2抑制剂DRB对Aβ1-42诱导的神经毒性的干预效果。研究发现两者均能通过抑制β-分泌酶(BACE1)、激活α-分泌酶(ADAM10)减少Aβ生成，并下调磷酸化Tau(T181)和凋亡相关蛋白表达，为AD靶向治疗提供了新思路。成果发表于《Molecular Neurobiology》。

　　

阿尔茨海默病（AD）作为最常见的神经退行性疾病，全球每3秒就新增1例患者，其典型病理特征包括β-淀粉样蛋白（Aβ）沉积形成的老年斑、tau蛋白过度磷酸化导致的神经纤维缠结，以及神经元凋亡。尽管已有部分对症治疗药物，但能逆转疾病进程的疗法仍属空白。更棘手的是，关键致病机制尚未完全阐明——比如蛋白激酶CK2在AD中扮演着"双面角色"：既有研究显示它可能促进tau病理，也有证据表明其能抑制Aβ产生。与此同时，天然化合物橙皮苷虽在动物模型中展现神经保护潜力，但其作用机制特别是与CK2通路的关联仍是未解之谜。

为破解这些科学难题，土耳其埃尔吉耶斯大学联合哈斯特帕大学的研究团队在《Molecular Neurobiology》发表了一项突破性研究。他们创新性地将人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分化为胆碱能神经元样细胞，构建了Aβ_1-42诱导的AD体外模型，首次系统比较了CK2特异性抑制剂DRB与橙皮苷的神经保护机制。这项研究不仅揭示了CK2在AD病理中的关键作用，更为开发多靶点抗AD药物提供了实验依据。

研究团队运用了三大关键技术：通过全反式维甲酸（RA）和脑源性神经营养因子（BDNF）序贯诱导实现SH-SY5Y细胞向胆碱能神经元分化；采用MTT法评估细胞活力和药物毒性；结合RT-qPCR和ELISA技术检测AD相关标志物基因表达及蛋白水平。

Morphological Changes and Neurite Analysis in SH-SY5Y Cell Differentiation
通过5天RA+2天BDNF的序贯诱导，细胞形态发生显著改变：神经突长度从对照组的23.4μm增至48.6μm（p<0.001），同时神经元标志物MAP2和NeuN基因表达分别提升3.2倍和2.8倍，胆碱能特征标记物AChE增加2.1倍，成功建立具有成熟神经元特性的细胞模型。

Effects of Hesperidin and DRB on Cell Viability in d-SH-SY5Y Cells
剂量实验显示，橙皮苷在200μM浓度下仍保持83%细胞存活率，而DRB的IC₅₀值在24小时为11.83μM。针对20μM Aβ_1-42建立的AD模型，25-50μM橙皮苷预处理使细胞存活率从76.4%恢复至89.2%（p<0.005），但DRB仅表现出轻微保护趋势。

Pre-Treatment with Hesperidin and DRB Affected Alzheimer's Markers
在分子机制层面，两种化合物均展现出显著调控作用：

• 淀粉样通路：橙皮苷（50μM）使ADAM10（α-分泌酶）表达提升2倍，同时将BACE1（β-分泌酶）表达降低1.8倍（p<0.005）；DRB（0.5μM）产生相似效果
• 病理蛋白：两者均使Aβ_1-42水平下降42-47%（p<0.01），磷酸化Tau(T181)减少35-38%（p<0.05）

Pre-Treatment with Hesperidin and DRB Decreased CK2 Gene Expression
关键发现显示，Aβ_1-42使CK2α基因表达上调2.1倍（p<0.01），而0.5μM DRB可将其降低46%（p<0.01），但橙皮苷对CK2表达无显著影响，提示二者作用机制存在差异。

Pre-Treatment with Hesperidin and DRB Decreased Apoptosis
在凋亡调控方面，橙皮苷（50μM）使促凋亡蛋白Bax下降31%，抗凋亡蛋白Bcl-2增加28%，将Bax/Bcl-2比值从2.4降至1.3（p<0.01）；DRB（0.25μM）也显著改善该比值（p<0.05）。

这项研究首次揭示：CK2抑制剂DRB通过直接抑制CK2α表达发挥神经保护作用，而橙皮苷则通过独立于CK2的通路——可能是其已知的抗氧化和抗炎特性——实现相似效果。二者共同特点是能协同调控淀粉样蛋白生成通路（抑制BACE1/激活ADAM10）和凋亡信号，这为开发针对AD多重病理机制的"鸡尾酒疗法"提供了理论支持。特别值得注意的是，橙皮苷作为天然化合物展现出的低毒性和多靶点效应，使其成为极具临床转化潜力的候选药物。

研究的局限性在于尚未阐明橙皮苷作用的具体分子靶点，且体外模型不能完全模拟AD复杂的微环境。Hamiyet Eciroglu-Sarban等研究者建议，未来应结合转基因动物模型进一步验证这些发现，并探索DRB结构优化以降低其细胞毒性的可能性。这项成果不仅为AD治疗提供了新的靶点选择策略，更开创了天然化合物与蛋白激酶抑制剂联合研究的新范式。