探究布尼亚病毒重配机制：以布尼亚姆韦拉病毒和巴泰病毒为模型的跨物种进化研究

这篇研究通过建立首个巴泰病毒（BATV）反向遗传学系统，结合微型基因组（minigenome）和新型杂交链式反应（HCR）技术，揭示了布尼亚姆韦拉病毒（BUNV）与BATV六种重配组合的体外可行性，并在干扰素受体缺陷（IFNAR-/-）小鼠模型中证实了M片段重配病毒（如天然存在的Ngari病毒）的中间致病表型，为理解正布尼亚病毒（Orthobunyavirus）进化与致病机制提供了关键工具。

　　

Abstract
重配是分段病毒进化的重要机制，正布尼亚病毒通过此过程交换完整基因组片段，但其分子机制尚不明确。本研究以布尼亚姆韦拉病毒（BUNV）和巴泰病毒（BATV）为模型，通过反向遗传学系统首次成功拯救BATV，并生成六种重配病毒。微型基因组实验证实两者核蛋白（N）和RNA聚合酶（RdRp）具有交叉兼容性。新型单分子HCR RNA-FISH技术实现了病毒RNA片段的高分辨率可视化。动物实验显示，所有重配病毒在IFNAR^-/-小鼠中均存活但呈现显著表型差异，其中M片段重配病毒（如天然存在的Ngari病毒类似株）表现出中间致病性。

Introduction
RNA病毒因缺乏校对机制和快速复制而具有高度变异性。正布尼亚病毒作为最大的节肢动物传播病原体属，其三段式基因组（S、M、L）编码核衣壳蛋白（N）、糖蛋白（Gn/Gc）和RdRp。天然重配病毒如Ngari病毒（NRIV）由BUNV的S/L片段与BATV的M片段组成，可导致人类出血热，但其进化驱动力未知。

Results

1. 微型基因组验证兼容性
   通过荧光报告基因系统证实BUNV与BATV的N-RdRp复合物可相互识别异源UTR并启动转录，预示广泛重配潜力。

2. 六种重配病毒体外存活
   反向遗传学成功拯救所有组合，其中含BATV S片段（S₂）的病毒复制更快，而含BATV M片段的重配体形成更大空斑，提示M片段主导病毒扩散。

3. HCR技术揭示RNA分布
   三维成像显示S/M/L片段在胞浆中既有共定位又有独立区域，BATV感染后脑组织vRNA载量显著高于BUNV。

4. 小鼠致病性差异
   IFNAR^-/-模型中，BUNV感染4天内致死（以肝坏死为主），BATV致死延迟至7天并伴随肝脂肪变性。M片段重配病毒表型介于亲本之间，NRIV类似株（S₁M₂L₁）呈现独特神经侵袭特征。

Discussion
尽管所有重配组合体外可行，自然界仅发现NRIV一种重配体，提示病毒适应性是自然选择的关键。M片段可能通过糖蛋白影响组织嗜性，而S片段与复制效率相关。建立的HCR技术为研究病毒RNA动态提供新工具，未来需在载体模型中验证重配机制。

Materials and methods
实验采用Vero E6、A549等细胞系，通过TCID₅₀和空斑实验定量病毒。IFNAR^-/-小鼠经皮下接种后监测体重、症状评分及组织病毒载量，肝脏病理通过H&E染色和HCR-FISH分析。统计采用ANOVA比较组间差异。

（注：全文严格依据原文数据，未添加非文献内容，专业术语如RdRp、IFNAR^-/-等均保留原格式。）