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Cyto-Cellect®PLUS提供增强的人IgG检测能力!
【字体: 大 中 小 】 时间:2025年05月26日 来源:基因有限公司
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Cyto-Cellect®PLUS是适配于Cyto-Mine®的人IgG检测试剂盒,可检测皮滴包裹细胞中分泌的具有κ和λ轻链的全分子人IgG。
Cyto-Cellect®PLUS是适配于Cyto-Mine®的人IgG检测试剂盒,可检测皮滴包裹细胞中分泌的具有κ和λ轻链的全分子人IgG。其检测原理如图1所示:一对定制的IgG特异性AOF荧光探针被包裹在每个皮滴中。从包裹细胞中分泌的IgG被检测探针对识别,形成诱导荧光信号变化的三元FRET复合物。Cyto-Cellect®PLUS结合Cyto-Mine®可根据CHO细胞的生产率进行富集和单细胞分配。
图1. Cyto-Cellect®PLUS IgG分泌细胞检测示意图。
该试剂盒的具体表现如何?让我们一起来看看~
1. Cyto-Cellect®PLUS探针与人IgG分子的结合
通过ELISA测定Cyto-Cellect®PLUS供体和受体探针与人IgGκ和IgGλ的结合。供体(图2A)和受体(图2B)探针均以高亲和力结合IgGκ和λ分子。IgG亚类与供体和受体的结合差异明显,与其他IgG1λ和IgG2λ相比,IgG3λ和IgG4λ与供体和受体的结合差异至少为2倍(EC50值)。
图2. 使用ELISA测定Cyto-Cellect®PLUS探针与人IgG分子的结合。
2. 在微孔板读板机中使用Cyto-Cellect®PLUS检测人IgG
使用市售IgG或细胞培养物上清液中分泌的IgG测定Cyto-Cellect®PLUS检测人IgG分子的能力。CytoCellect®PLUS显示出对商业IgG 1 -4κ的剂量依赖性应答(图3A)。图3 B和C显示使用Cyto-Cellect®PLUS对IgG1λ和3λ的FRET应答,尽管来自不同商业来源的IgG1λ显示出良好的检测效果,但在较低检测浓度下无法检出IgG3λ。而使用Cyto-Cellect®试剂盒显示,尽管IgG 4κ可被检测到,但IgG1λ不能被该试剂盒检测到(图3C)。
图3. 使用市售IgG或细胞培养物上清液中分泌的IgG测定Cyto-Cellect®PLUS的FRET响应。(A和B)在Cyto-Cellect®PLUS探针的存在下滴定商业来源的抗体。(C)在Cyto-Cellect®或Cyto-Cellect®PLUS探针的存在下滴定含有IgG 1λ的上清液。作为对照,滴定市售IgG 4κ,并通过两种试剂盒检测。
3. 在Cyto-Mine®中使用Cyto-Cellect®PLUS检测并分配分泌IgG的CHO细胞
将分泌IgG 1λ或IgG 4κ的CHO细胞和Cyto-Cellect®PLUS FRET探针包裹在皮滴中,37°C孵育,以获得抗体分泌的最佳条件。分泌的抗体在皮滴内积累,通过Cyto-Cellect®PLUS FRET探针捕获并检测。在Cyto-Mine®中检测分泌抗体的细胞,并分配到组织培养板中。
图4A显示了在细胞与Cyto-Cellect®PLUS探针孵育2小时后,分泌IgG 4κ的CHO细胞的FRET响应。Cyto-Cellect®PLUS也用于分泌IgG 1λ的CHO细胞的检测、分选和分配(图4 B-C)。图4B显示了细胞的富集,然后在Cyto-Mine®中利用Cyto-Cellect®PLUS进行单细胞分配(图4C)。
图4. Cyto-Cellect®PLUS用于在Cyto-Mine®中富集和单细胞分配分泌IgG的CHO细胞。
4. Cyto-Cellect®PLUS与人IgM、IgA和小鼠IgG的交叉反应性
为了确定Cyto-Cellect®PLUS探针与除人IgG之外的免疫球蛋白同种型的交叉反应性,在Cyto-Cellect®PLUS探针存在下滴定商业来源的人IgM、IgA和小鼠IgG。并使用酶标仪检测FRET反应。IgG 1 λ用作对照。图5显示Cyto-Cellect® PLUS在测试浓度下与人IgA或小鼠IgG无交叉反应性。然而,在高浓度下观察到人IgM的最小检测。
图5. Cyto-Cellect®PLUS与人和小鼠免疫球蛋白的交叉反应性。
Summary
Cyto-Cellect®PLUS可对分泌的人IgG(κ和λ轻链)提供灵敏的FRET反应,并与酶标仪和Cyto-Mine®兼容。该检测试剂盒可根据CHO细胞的生产率进行富集和单细胞分配。
与Cyto-Mine®的兼容性:Cyto-Cellect®PLUS可与Cyto-Mine®结合使用,根据生产率分选和分配单细胞。
增强的人IgG检测能力:提供对人IgGκ和λ轻链的检测。
低交叉反应性:试剂盒与人IgM、IgA和小鼠IgG无/低交叉反应性。
无动物源性(AOF):Cyto-Cellect®PLUS是AOF,可与Cyto-Mine®一起用作治疗性细胞系开发(CLD)工作流程的一部分。
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