基于新型特异性脂蛋白LP53的间接ELISA技术开发及其在鸡滑液囊支原体抗体检测中的应用

为解决鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae, MS）诊断中抗原变异导致的假阴性问题，中国农业科学院上海兽医研究所团队筛选出高度保守的膜相关脂蛋白MSLP53，建立了一种高灵敏度（85.54%）、高特异性（89.19%）的间接ELISA方法。该技术可延长抗体检测窗口期至感染后18周，优于商用IDEXX试剂盒（仅12周），为MS流行病学监测提供了新工具。

　　

鸡滑液囊支原体（Mycoplasma synoviae, MS）是家禽业的重要病原体，可引发关节炎、气囊炎和蛋壳顶端异常，每年造成巨大经济损失。传统诊断方法如血清平板凝集试验（SPA）和血凝抑制试验（HI）存在交叉反应或操作复杂的问题，而现有ELISA试剂盒依赖易变异的MSPB抗原，可能导致假阴性。中国农业科学院上海兽医研究所的研究团队通过生物信息学分析锁定高度保守的膜脂蛋白MSLP53，开发出新型检测技术，相关成果发表于《BMC Veterinary Research》。

研究采用生物信息学预测、原核表达系统制备重组MSLP53（rMSLP53），通过免疫印迹验证其特异性后，建立间接ELISA方法。临床样本（277份鸡血清）和实验感染队列（16只SPF鸡）评估显示，该方法与IDEXX试剂盒总符合率达87%，且能延长抗体检出窗口期6周。

生物信息学分析
通过ExPASy和Prosite工具预测MSLP53为53.6 kDa膜脂蛋白，BLASTp比对显示其在26株MS中保守性达97.79-100%，而与其他物种同源性<26.34%。

蛋白表达与验证
重叠PCR修饰TGA密码子后，于大肠杆菌中可溶性表达His标签rMSLP53（图1）。Western blot证实其仅与MS阳性血清反应（图2），不与MG、NDV等病原体抗体交叉。

ELISA优化
方阵滴定确定最佳条件：包被浓度0.63 μg/mL，血清稀释1:500，酶标二抗1:20 000（表1-2）。ROC曲线确定临界值OD_{450 nm}=0.2960，临床验证灵敏度85.54%，特异性89.19%（图3）。

应用优势
实验感染组中，rMSLP53-ELISA在3-18周均检出抗体，而IDEXX仅维持至12周（图4）。对MS不同分离株的检测OD值均>0.7，其他病原体血清均低于临界值（图5）。

该研究首次将MSLP53作为诊断抗原，其高保守性克服了MSPB抗原变异缺陷。建立的ELISA方法具备更长的抗体监测周期和良好的临床适用性，为MS防控提供了可靠技术支撑。团队建议进一步开展多中心验证以优化标准化流程。