印尼蝙蝠中副粘病毒半综合检测方法的开发与验证：新型病毒发现及人畜共患病风险评估

为解决蝙蝠作为人畜共患病病毒库的监测难题，日本北海道大学等机构研究人员开发了一种整合广谱RT-PCR与多重测序的半综合检测方法，成功从印尼蝙蝠中鉴定出7种新型副粘病毒样序列（相似性70.88-82.44%），为未知病原体筛查和疫情预警提供了经济高效的技术方案。

　　

蝙蝠作为自然界重要的病毒储存库，其携带的病原体如尼帕病毒、亨德拉病毒等已多次引发致命人畜共患病疫情。印尼作为全球蝙蝠多样性热点地区，野生动物市场交易频繁，病毒跨物种传播风险尤为突出。然而，传统检测方法依赖已知病原体信息，难以应对未知病毒的筛查需求。日本北海道大学国际人兽共患病控制研究所联合印尼加札马达大学的研究团队，在《Scientific Reports》发表了一项创新性研究，开发出整合广谱PCR与高通量测序的半综合检测系统，为蝙蝠病毒组监测提供了新工具。

研究采用三大关键技术：1）优化三组半巢式RT-PCR引物（RMH/ARb/PNE）覆盖副粘病毒科（Paramyxoviridae）和肺病毒科（Pneumoviridae），通过8核苷酸索引实现低成本多重测序；2）使用Illumina和纳米孔双平台测序验证；3）通过桥接PCR确认病毒基因组连续性。样本来自印尼4个岛屿135只蝙蝠（22种）的气管和直肠拭子。

结果部分显示：

1. 稳健特异的PCR扩增：优化后RMH/ARb/PNE PCR的检测限分别为1-10/100-1000/10-100拷贝/反应，特异性验证显示无交叉反应。
2. 蝙蝠样本中的病毒检测：ARb PCR从7份样本（包括果蝠Cynopterus brachyotis和狐蝠Rousettus amplexicaudatus）中鉴定出与Achimota病毒（相似性80.85-82.44%）等相关的7条新序列，桥接PCR证实T-LB16样本携带的Tuhoko病毒3样序列（75.99%相似性）。
3. 系统验证：PAR引物组补充检测出Henipavirus样序列（T-NP19样本，73.12%相似性），揭示同一宿主可能共存不同属病毒。
4. 地理分布特征：病毒阳性率在Gunungkidul（9%）、Labuan Bajo（7%）和Nusa Penida（3%）呈梯度分布，反映生态差异对病毒传播的影响。

结论指出，该方法以单次测序成本实现多病原体筛查，发现的低相似性新序列（如Orthorubulavirus/R-LB06仅70.88%相似性）凸显蝙蝠携带病毒的未知风险。尽管这些病毒的人类致病性尚未明确，但技术框架可扩展至其他病原体监测，为"One Health"策略提供关键支持。研究首次系统描绘了印尼蝙蝠副粘病毒多样性图谱，其中Eonycteris spelaea同时携带Orthorubulavirus和Pararubulavirus的现象，为理解病毒共感染机制提供了新线索。