NSC632839通过纺锤体检查点介导的有丝分裂阻滞和CREB-Noxa依赖性凋亡抑制食管鳞癌细胞增殖的机制研究

为解决食管鳞癌(ESCC)传统化疗耐药性问题，郑州大学团队发现泛去泛素化酶抑制剂NSC632839通过激活纺锤体检查点(SAC)导致多极纺锤体形成，引发CREB-Noxa信号轴介导的线粒体凋亡，并揭示其诱导保护性自噬的双重作用。该研究为ESCC靶向治疗提供了新策略，发表于《Cancer Cell International》。

　　

食管癌作为全球第六大癌症死因，其中食管鳞状细胞癌(ESCC)占病例的80-85%，五年生存率始终徘徊在较低水平。传统化疗面临耐药性瓶颈，而靶向去泛素化酶(DUBs)因其对癌细胞的特异性杀伤作用成为研究热点。郑州大学基础医学院团队聚焦泛DUB抑制剂NSC632839，系统揭示了其在ESCC中的分子机制，相关成果发表于《Cancer Cell International》。

研究采用CCK-8检测细胞活力、流式细胞术分析周期与凋亡、免疫荧光观察纺锤体形态、免疫印迹评估蛋白表达等关键技术。通过Kyse30和Kyse450细胞模型，结合MPS1激酶抑制剂reversine和自噬抑制剂CQ/BafA1的干预实验，全面解析药物作用机制。

【NSC632839抑制ESCC细胞增殖】
实验显示NSC632839以剂量/时间依赖性方式积累多聚泛素化蛋白，显著降低细胞活力（CCK-8检测IC₅₀约2.5-3.5μM），EdU实验证实其抑制DNA合成效率达60%-70%，克隆形成实验证明长期抑增殖效应。

【诱导M期阻滞的分子机制】
流式检测发现G₂/M期细胞增加3-4倍，免疫荧光显示磷酸化组蛋白H3(p-H3^Ser10)阳性细胞比例提升5倍。α-微管蛋白染色揭示多极纺锤体形成，伴随Aurora A/B和PLK1磷酸化水平升高，证实SAC持续激活导致核形态异常（巨核/多核现象）。

【CREB-Noxa轴介导线粒体凋亡】
线粒体膜电位(MMP)检测显示去极化率>40%，caspase-3活性增加3倍。免疫印迹显示Noxa表达上调2.5倍而cIAP1下调60%。关键发现是CREB抑制剂666-15可逆转Noxa表达和凋亡，时序实验证实M期阻滞（8h）早于凋亡（18h），且reversine能解除SAC依赖的CREB激活。

【自噬的双刃剑效应】
LC3-II蛋白水平增加2倍，吖啶橙染色显示自噬溶酶体积累。联合自噬抑制剂使凋亡率从35%提升至65%，证实其保护作用。

该研究首次阐明NSC632839通过"SAC-CREB-Noxa"级联反应触发ESCC细胞凋亡的分子通路，同时揭示自噬的耐药屏障作用。不仅为DUB抑制剂临床应用提供理论依据，更创新性提出"SAC抑制剂+DUB抑制剂"的联合治疗策略，对克服ESCC化疗耐药具有重要转化价值。团队特别指出，NSC632839对正常细胞（如HEK293）的低毒性特征，为其后续开发奠定了安全性基础。