六味地黄丸通过SIRT1/PI3K/AKT通路调控自噬与氧化应激改善卵巢功能的机制研究

本研究揭示了六味地黄丸（LWDH）通过激活SIRT1/PI3K/AKT通路，显著改善环磷酰胺（CTX）诱导的卵巢功能损伤。实验证实LWDH可提升抗氧化酶（SOD、GSH-Px）活性、降低脂质过氧化产物（MDA），抑制颗粒细胞过度凋亡（Bax/Caspase-3↓、Bcl2↑），并平衡自噬水平（LC3-II↓、p62↑）。该发现为中医药治疗原发性卵巢功能不全（POI）提供了分子机制支持。

　　

六味地黄丸改善卵巢功能的分子机制解析

卵巢功能损伤模型构建与LWDH干预
通过腹腔注射环磷酰胺（CTX）建立小鼠原发性卵巢功能不全（POI）模型，采用低剂量（1.56 g/kg）和高剂量（3.12 g/kg）LWDH灌胃干预。实验显示，LWDH显著提升卵巢指数和血清抗穆勒氏管激素（AMH）、雌二醇（E₂）水平，同时降低促卵泡激素（FSH），表明其改善内分泌功能。联合SIRT1抑制剂EX-527后，疗效被逆转，证实SIRT1通路的关键作用。

抗氧化应激的调控作用
LWDH治疗组血清超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性较CTX组提升1.5倍，丙二醛（MDA）水平降低40%。透射电镜观察到颗粒细胞中线粒体超氧化物歧化酶（SOD2）蛋白表达上调，提示LWDH通过增强线粒体抗氧化防御系统减轻氧化损伤。

凋亡与自噬的双重调控
流式细胞术显示LWDH使颗粒细胞凋亡率从CTX组的35%降至12%。Western blot分析表明，LWDH下调促凋亡蛋白Bax和Cleaved Caspase-3表达，同时上调抗凋亡蛋白Bcl2。自噬标志物检测发现，LWDH组LC3-II荧光强度降低50%，自噬体数量减少，而自噬底物p62积累增加，表明其抑制过度自噬流。

SIRT1/PI3K/AKT通路的核心地位
蛋白免疫印迹显示LWDH显著激活磷酸化PI3K（p-PI3K）和磷酸化AKT（p-AKT），促进细胞存活信号。SIRT1蛋白表达量较模型组增加2.1倍，而EX-527处理使该效应消失，验证了SIRT1通过去乙酰化作用调控PI3K/AKT通路的分子机制。

研究局限与转化价值
当前实验未涉及人类卵巢组织，且CTX模型仅模拟化疗性卵巢损伤。但LWDH多组分协同作用（如地黄多糖、丹皮酚）为开发靶向SIRT1的卵巢保护剂提供了新思路，其调控氧化应激-自噬-凋亡网络的特性在生殖医学领域具有潜在应用前景。