功能性抗氧化剂增强γδ T细胞扩增及其对膀胱癌细胞杀伤效应的机制研究

本研究针对膀胱癌治疗中免疫疗法响应率低的难题，探索了N-乙酰半胱氨酸（NAC）、维生素C/E等抗氧化剂对γδ T细胞扩增和肿瘤杀伤功能的调控作用。通过体外实验证实，抗氧化剂处理可显著增强γδ T细胞对膀胱癌细胞的细胞毒性，同时维持CD3+Vγ9+亚群比例，为优化过继性T细胞疗法（ACT）提供了新策略。

　　

膀胱癌作为泌尿系统高死亡率恶性肿瘤，晚期患者五年生存率不足5%，现有免疫检查点抑制剂仅对25%患者有效。肿瘤微环境中的活性氧（ROS）会加速T细胞耗竭，而γδ T细胞因其不依赖MHC的独特杀伤机制，成为突破治疗瓶颈的新希望。然而，如何提升γδ T细胞的扩增效率和抗肿瘤活性仍是未解难题。

中国台湾省彰化基督教医院联合中兴大学的研究团队在《BMC Cancer》发表的研究中，创新性地将抗氧化剂引入γδ T细胞培养体系。通过14天的体外诱导实验，发现NAC虽在高浓度（24 mM）下轻微抑制T细胞增殖，但能显著提升其对T24膀胱癌细胞的杀伤率；维生素E则通过调控CD314（NKG2D）受体表达增强细胞毒性。该研究首次系统比较了三种抗氧化剂对γδ T细胞功能的影响，为临床优化免疫细胞制备方案提供了理论依据。

研究采用外周血单个核细胞（PBMC）体外诱导γδ T细胞，通过流式细胞术分析CD3⁺Vγ9⁺、CD56⁺等亚群比例，并采用Alamar Blue法检测癌细胞存活率。关键发现包括：

激活和扩增
在含唑来膦酸的培养基中，NAC呈剂量依赖性抑制T细胞扩增（18.7%），而维生素E仅造成1.9%的增殖抑制。流式数据显示维生素E处理组CD3⁺Vγ9⁺细胞比例显著升高，提示其特异性促进γδ T细胞亚群扩增。

表型特征
抗氧化剂处理使CD3^-CD56⁺ NK样细胞增加，但高剂量维生素E会降低CD3⁺CD56⁺ NKT细胞比例。值得注意的是，CD314（NKG2D）表达在NAC处理组明显下调，这可能影响肿瘤识别能力。

细胞毒性
在效应细胞:靶细胞=5:1的共培养体系中，NAC预处理组对膀胱癌细胞的杀伤效果最佳，存活率降低超过对照组50%。维生素C/E组也展现出协同增强效应，证实抗氧化剂能逆转T细胞耗竭。

讨论部分指出，γδ T细胞通过分泌穿孔素、颗粒酶及IFN-γ等效应分子杀伤肿瘤，而ROS会诱导线粒体膜电位崩溃。NAC通过提升谷胱甘肽水平维持T细胞代谢稳态，这与近期《Cell》报道的STAT1蛋白维生素C修饰机制相呼应。尽管高浓度NAC可能抑制TCR信号通路，但其在提升T细胞记忆形成方面的优势仍使其成为ACT疗法的理想辅助剂。

该研究的临床意义在于：首次建立抗氧化剂-γδ T细胞协同治疗膀胱癌的体外模型，为联合免疫疗法提供新思路；揭示维生素E通过NKG2D通路增强肿瘤识别的机制，为靶点筛选提供依据。未来需在动物模型中验证长期疗效，并探索与其他免疫调节剂的联用策略。