α-半乳糖神经酰胺佐剂mRNA癌症疫苗的临床前毒理学评估：Wistar Han大鼠与家猪模型的安全性验证

（编辑推荐）本研究首次系统评估了Galsome-NEO平台（含α-GC佐剂的mRNA-LNP疫苗）在啮齿类（Wistar Han大鼠）和大型动物（家猪）中的安全性特征。结果显示该疫苗可诱导可控的炎症反应（IL-6/MCP-1/CXCL1上调），临床表现为短暂性局部反应（最高3级）和急性期蛋白升高，且所有异常指标在3周内恢复。特别值得注意的是，猪模型对100 μg剂量耐受良好，同时检测到iNKT细胞激活和MOMP特异性T细胞反应，为后续非小细胞肺癌（NSCLC）的I期临床试验提供了关键安全性依据。

　　

研究背景与技术平台
Galsome-NEO是一种创新性mRNA癌症疫苗平台，通过脂质纳米颗粒（LNP）封装尿苷修饰（N1-甲基假尿苷，1mψ）的mRNA，并佐以α-半乳糖神经酰胺（α-GC）。该技术旨在激活传统T细胞和恒定自然杀伤T细胞（iNKT），形成多维度抗肿瘤免疫应答。本研究选择Wistar Han大鼠和家猪作为模型，模拟人体免疫系统特征（均表达α-GC反应性iNKT细胞），为后续针对程序性死亡配体1阴性（PD-L1^-）非小细胞肺癌患者的I期临床试验奠定基础。

实验设计与剂量策略
大鼠接受3次30 μg剂量（双侧股二头肌注射，等效人体1,120 μg），猪采用剂量递增方案（3/15/100 μg）。值得注意的是，大鼠剂量通过体表面积换算确定，而猪模型采用与临床相似的间隔给药（7天）。设立恢复组（3周观察期）以评估毒性可逆性，并设置独立细胞因子组用于急性炎症监测。

临床观察与炎症反应
大鼠表现出显著剂量依赖性反应：

• 局部反应：雌性更易出现红斑/水肿（最高3级），48小时内消退
• 全身反应：体温升高达+2.5°C（雌性第2/3剂后），体重减轻≤10%
• 细胞因子风暴：6小时血浆检测显示IL-6（7倍）、MCP-1（4倍）、CXCL1（9倍）显著升高，与急性期蛋白A2M（428倍）和A1AGP（40倍）激增吻合

猪模型则显示优异耐受性：

• 仅100 μg剂量引起轻度IL-6升高（p=0.06）
• CRP仅上升2.4倍，远低于大鼠模型
• 无显著体温或体重变化

血液学与组织病理学发现
大鼠特异性改变：

• 血小板减少32%伴凝血时间延长（16% PT延长），3周内恢复
• 肝细胞空泡化（无伴随ALT/AST升高）和脾脏重量增加（雄性+25%）
• 注射部位肌纤维间持续免疫浸润（2只雌性恢复期仍存在）

跨物种共性现象：

• 网织红细胞减少（大鼠13%/猪35%）
• 胆固醇/甘油三酯暂时性下降（炎症期厌食相关）
• 注射部位中性粒细胞/单核细胞浸润

免疫激活证据

• iNKT细胞应答：大鼠淋巴结iNKT细胞增加，猪外周血3/6个体显示持续增殖
• 抗原特异性T细胞：猪PBMCs经MOMP肽刺激后，CD8⁺增殖最显著，伴随IFN-γ/TNF-α/IL-12分泌
• 交叉验证：100 μg单剂量预实验显示更强T细胞反应，印证剂量依赖性

机制讨论与转化价值
研究揭示了C12-200离子化脂质的核心作用——其促炎特性强于SM-102（Moderna采用脂质），这与IL-6/MCP-1水平正相关。值得注意的是，肝细胞空泡化与BNT162b2（辉瑞）和mRNA-1273（Moderna）临床前数据一致，提示为LNP载体共性现象而非α-GC毒性（仅含90 ng/剂）。

临床指导意义
该研究首次建立α-GC佐剂mRNA疫苗的大型动物安全性数据库：

1. 确定30 μg为大鼠最大耐受剂量（MTD）
2. 验证猪模型对100 μg的耐受性，支持临床剂量爬坡设计
3. 揭示血小板减少和肝酶变化需作为临床监测重点

这些发现不仅支持Galsome-NEO进入NSCLC临床试验阶段，也为其他iNKT靶向疫苗的开发提供了毒性评估框架。