基于时间分辨荧光免疫分析的猪流行性腹泻病毒现场早期检测技术(PED-TRFIA)开发与应用

【编辑推荐】针对猪流行性腹泻病毒(PEDV)现场检测灵敏度不足的难题，山西农业大学团队开发了基于时间分辨荧光微球(TRFMs)的PED-TRFIA技术。该技术通过Eu3+纳米颗粒信号放大系统，实现9.76×102 TCID50/mL的检测限，较商业试剂盒提升64倍，15分钟内即可完成GI/GII基因型同步检测，为PEDV早期防控提供高效工具。

　　

猪流行性腹泻病毒(PEDV)是危害全球养猪业的头号肠道冠状病毒，其GII基因型感染可导致仔猪100%死亡率。当前防控面临两大痛点：一是传统检测方法如病毒分离耗时费力，qPCR需要精密仪器；二是现有快速检测试纸条（如胶体金法）灵敏度不足，难以捕捉早期感染。更棘手的是，PEDV已出现GI/GII基因型变异株，而市售疫苗基于CV777等传统毒株，防控效果受限。山西农业大学研究团队在《Analytica Chimica Acta》发表的研究，创新性地将时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)技术与横向流动免疫层析(LFIA)平台结合，开发出PED-TRFIA检测系统。

关键技术包括：1）采用192.28 nm时间分辨荧光微球(TRFMs)负载Eu³⁺纳米颗粒，通过羧基化表面偶联PEDV单克隆抗体；2）构建双抗体夹心体系（检测线含PEDV捕获抗体，质控线含鸡源IgY/羊抗鸡IgY）；3）使用便携式TRFIA读数仪实现现场定量检测；4）临床样本验证涵盖山西地区368份猪场样本。

【TRFM表征】扫描电镜显示TRFMs呈均匀球形（直径192.28 nm），荧光寿命达718.36 μs，斯托克斯位移272 nm，有效抑制背景荧光干扰。

【灵敏度】对PEDV GI/GII基因型的检测限低至9.76×10² TCID₅₀/mL，较商品化试剂盒提升64倍，线性范围跨越3个数量级。

【特异性】与PRRSV、PRV、TGEV等常见猪病原体无交叉反应，CV值（阳性样本6.52%，阴性14.35%）表明重复性优异。

【临床验证】368份临床样本检测准确率达100%，与qPCR结果完全一致，且15分钟即可完成现场检测。

该研究的突破性在于：首次将TRFMs应用于PEDV现场检测，通过Eu³⁺的长寿命荧光特性（>500 μs）实现背景荧光抑制，解决了传统LFIA灵敏度不足的瓶颈。设计的鸡源IgY质控系统兼具成本优势（较哺乳动物抗体降低60%成本）和热稳定性（冻存后活性保持95%以上）。更重要的是，该方法可同步识别GI/GII基因型变异株，为疫苗免疫效果评估提供新工具。研究团队特别指出，该技术平台可拓展至其他动物冠状病毒检测，对应对未来可能出现的跨物种传播风险具有前瞻性意义。