可激活适体探针TAA-Q2c2:石斑鱼虹彩病毒(SGIV)快速检测新策略

【字体: 时间:2025年06月03日 来源:Aquaculture 3.9

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  本研究针对石斑鱼虹彩病毒(SGIV)引发的养殖业重大经济损失,开发了一种靶向激活型适体探针TAA-Q2c2。该探针在500 nM工作浓度、4-28°C条件下仅需1分钟即可实现103 cells/mL灵敏度检测,与RT-qPCR相当但更适用于现场应用,为水产病毒早期监测提供了新型工具。

  

石斑鱼作为我国年产量超10万吨的重要经济鱼类,近年来因集约化养殖导致新加坡石斑鱼虹彩病毒(SGIV)频繁暴发,幼苗期死亡率高达90%。传统防控依赖中草药提取物(如紫花地丁水提物抑制率>99%),但实际效果受水域环境影响显著。现有qPCR、电镜观察等方法虽精准,却因操作复杂、耗时长难以满足养殖现场需求。适体(Aptamer)作为抗体替代物,通过SELEX(系统进化配体指数富集)技术筛选获得,但传统"常开"型荧光探针存在背景噪声高的问题。

广西科学院研究团队在《Aquaculture》发表的研究中,创新性开发了靶向激活型适体探针TAA-Q2c2。该团队采用石斑鱼脾脏细胞系(GS细胞)建立SGIV感染模型,通过序列截短改造获得Q2c适体,构建"信号关闭-靶标激活"探针体系。关键技术包括:1) GS细胞病毒培养模型;2) 适体特异性验证(对比神经坏死病毒NNV);3) 荧光标记Cy5-Q2c探针优化;4) 现场适用性参数测试。

研究结果

  1. 特异性验证:Cy5-Q2c仅对SGIV感染细胞产生荧光激活,NNV感染组信号强度与空白组无差异,证实其特异性。
  2. 参数优化:探针在500 nM浓度、4-28°C宽温域下1分钟即可完成检测,灵敏度达103 SGIV感染细胞/mL。
  3. 现场适用性:相比需2-4小时的RT-qPCR,该技术将检测流程缩短至2小时内,且无需专业设备。

讨论与意义
该研究首次将"关闭-激活"机制应用于水产病毒检测,通过TAA-Q2c2探针实现:1) 背景信号降低10倍;2) 热带养殖场环境适应性(28°C仍有效);3) 与PCR相当的灵敏度。作者Mingzhu Liu等指出,这项技术为《十四五"全国渔业规划》提出的病害防控目标提供了现场解决方案。未来可进一步开发为试纸条形式,推动水产病毒检测从实验室走向塘头。研究获广西自然科学基金(2023GXNSFAA026325)等资助,伦理审批号KX20240301。

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