靶向EphA2-CD11b双特异性抗体的肿瘤靶向效率开发与表征研究

为解决肿瘤靶向治疗中抗体特异性不足的问题，研究人员开发了同时靶向肿瘤抗原EphA2和免疫调节蛋白CD11b的双特异性抗体(BsAb)，通过64Cu标记和PET成像证实其显著提升肿瘤靶向性（24 h p.i.时阻断组肿瘤摄取达8.39±1.37%ID/g，p=0.0175），为优化肿瘤微环境靶向策略提供新思路。

　　

在肿瘤治疗领域，如何精准递送药物至病灶同时避免脱靶毒性一直是核心挑战。传统单靶点抗体常因肿瘤微环境(TME)的异质性导致疗效受限，而肿瘤相关巨噬细胞(TAMCs)和髓系来源的抑制细胞(MDSCs)通过表达CD11b等蛋白形成免疫抑制屏障，进一步阻碍治疗效率。针对这一难题，一项发表于《Bioconjugate Chemistry》的研究创新性地设计了同时靶向肿瘤细胞表面受体EphA2和免疫细胞标志物CD11b的双特异性抗体(BsAb)，通过双重靶向策略突破微环境屏障。

研究团队采用重组技术制备抗EphA2-CD11b-BsAb，通过NOTA-SCN螯合剂与放射性核素铜-64(⁶⁴Cu)偶联构建放射免疫偶联物。在HT1080纤维肉瘤荷瘤裸鼠模型中，结合PET动态成像和离体生物分布分析，系统评估了抗体在不同器官的靶向效率。关键技术包括：双特异性抗体的基因工程构建、⁶⁴Cu-NOTA放射性标记、小动物PET/CT成像、竞争性阻断实验设计及摩尔活性优化（对比3.7 MBq/nmol与22.2 MBq/nmol两组）。

放射标记抗体的体内分布特征
研究发现[⁶⁴Cu]Cu-NOTA-anti-EphA2-CD11b-BsAb在肿瘤中呈现持续滞留（4-48 h p.i.期间%ID/g维持在4.10-5.35），但肝脏和CD11b高表达器官（脾脏、骨髓、肺）存在显著脱靶摄取。这一现象揭示了CD11b靶向可能引发的非特异性结合问题。

竞争性阻断提升肿瘤靶向效率
通过共注射未标记抗CD11b-IgG或BsAb的阻断实验，CD11b阳性器官的放射性摄取显著降低（如脾脏摄取减少50%），同时肿瘤摄取在24 h p.i.时提升近2倍（8.39±1.37%ID/g vs 4.44±1.90%ID/g），证实通过饱和外周CD11b靶点可有效重分布抗体至肿瘤部位。

摩尔活性优化策略
低摩尔活性组（3.7 MBq/nmol）展现出更优的靶向特异性：较22.2 MBq/nmol组肿瘤摄取提升40%，且脾脏/骨髓摄取降低35%，表明适度的放射性标记密度可平衡靶向性与脱靶效应。

该研究证实抗EphA2-CD11b-BsAb能协同靶向肿瘤细胞和免疫抑制微环境，其创新性在于：首次通过放射性示踪定量揭示了双靶点抗体的时空分布规律；提出"摩尔活性调节"和"竞争性阻断"两种临床转化可行性策略；为开发下一代肿瘤微环境重编程疗法提供了理论依据。值得注意的是，肝脏的高摄取提示需进一步优化抗体Fc段或引入肝脏去靶向修饰，这些发现为后续工程化改造指明了方向。