基于A型和B型O抗原的伯克霍尔德菌假马耳他多糖结合疫苗的研发与交叉保护效应研究

针对伯克霍尔德菌假马耳他（Burkholderia pseudomallei）多血清型感染缺乏有效疫苗的问题，研究人员通过化学偶联技术将A/B血清型O抗原与T6SS效应蛋白Hcp1结合，开发了PEG2K/PEG5K双价结合疫苗。实验证明，A/B OPS-PEG5K-Hcp1能诱导高水平IgG抗体，对A/B血清型菌株的致死剂量感染提供100%交叉保护，为多血清型疫苗设计提供了新策略。

　　

论文解读
伯克霍尔德菌假马耳他（Burkholderia pseudomallei）是导致类鼻疽病的革兰阴性胞内病原体，被列为生物安全一级威胁病原体。全球每年约16.5万病例，死亡率高达40%，尤其在东南亚和中国海南流行。该菌分为A、B、B2三种O抗原血清型，其中A型占主导，但B型同样具有致病潜力。现有疫苗如灭活疫苗、减毒疫苗和亚单位疫苗存在保护不全或安全性问题，且尚无针对B血清型的疫苗报道。更棘手的是，该菌对抗生素天然耐药且易复发，亟需开发多血清型覆盖的疫苗。

针对这一挑战，中国人民解放军陆军军医大学的研究团队在《Carbohydrate Polymer Technologies and Applications》发表研究，首次基于A/B血清型O抗原与T6SS效应蛋白Hcp1，设计出PEG2K/PEG5K双价结合疫苗。通过化学偶联技术将O抗原与Hcp1蛋白连接，采用尺寸排阻色谱和核磁共振（¹H-NMR）验证结合效率，并通过小鼠模型评估免疫原性和保护效果。研究团队从中国海南分离的BPC006（A型）和BPC004（B型）菌株中提取O抗原，利用原核表达系统制备Hcp1蛋白，最终通过血清杀菌实验和组织病理学分析验证疫苗效能。

研究结果
3.1 结合疫苗的制备与表征
通过CNBr活化O抗原后与PEG2K/PEG5K连接，再偶联硫醇化Hcp1，获得两种疫苗（OPS/Hcp1重量比分别为1.13和1.33）。HPGPC和¹H-NMR显示结合成功，且PEG5K疫苗的O抗原暴露更充分。

3.2 强效免疫应答
A/B OPS-PEG5K-Hcp1诱导的OPS特异性IgG滴度达1.45×10⁶，显著高于单一抗原组（0.51×10⁶），且IgG1/IgG2a比值高，提示Th2型免疫优势。

3.3 交叉保护效果
4 LD₅₀攻毒实验中，PEG5K疫苗对A/B型菌株均实现100%存活，而PEG2K组存活率<60%。但80 LD₅₀ B型攻毒时，PEG5K组存活率降至40%，显示对超高剂量挑战的局限性。

3.5 杀菌机制
血清杀菌实验显示，PEG5K疫苗对B型菌的杀菌滴度（1:64）高于A型（1:4），荧光染色证实其可破坏细菌膜完整性。

结论与意义
该研究首次将B血清型O抗原纳入疫苗设计，证实PEG5K linker能优化抗原呈递，诱导交叉保护。尽管对超高剂量B型感染保护有限，但为多血清型疫苗开发提供了模板。未来需优化载体（如纳米颗粒）以增强清除能力，并探索细胞免疫协同作用。这一成果不仅填补了B血清型疫苗空白，也为其他多血清型病原体的疫苗设计提供了化学-免疫学协同新思路。