基于亲和超滤-分子对接联用策略筛选痛风汤散中具有双重降尿酸作用的多靶点活性成分

推荐：本研究针对高尿酸血症治疗中单靶点药物的局限性，通过亲和超滤(UF)-UPLC/MS结合分子对接技术，从藏药痛风汤散(TFTS)中筛选出1,3,6-三没食子酰葡萄糖(TRG)、1,2,3,6-四没食子酰葡萄糖(TEG)和1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖(PGG)三种新型黄嘌呤氧化酶(XOD)抑制剂，其IC50分别为54.46、15.91和6.58 μg/mL，并首次揭示这些成分通过下调URAT1/GLUT9转运体表达实现"抑制生成-促进排泄"双重调控，为多靶点抗高尿酸血症药物开发提供新思路。

　　

高尿酸血症已成为威胁现代人健康的"第四高"，其发病机制涉及尿酸生成过多（主要由黄嘌呤氧化酶XOD催化）和排泄障碍（与URAT1/GLUT9等转运体功能异常相关）。当前临床使用的别嘌呤醇等XOD抑制剂或苯溴马隆等促排泄药物均为单靶点药物，长期使用存在肝肾毒性等副作用。更棘手的是，约90%原发性高尿酸血症由尿酸排泄障碍引起，但现有药物对URAT1/GLUT9双靶点的协同调控仍属空白。藏药痛风汤散(TFTS)在西藏地区长期用于痛风治疗，但其药效物质基础不明，制约了现代化开发。

针对这些难题，江西中医药大学的研究团队在《Chinese Journal of Analytical Chemistry》发表了一项突破性研究。他们创新性地将亲和超滤(UF)与酶通道阻断技术(ECB)结合，通过UPLC-LTQ-Orbitrap-MS分析，从TFTS的60%乙醇洗脱部位(CF60)中快速筛选活性成分；采用分子动力学模拟解析化合物与XOD的相互作用模式；建立尿酸刺激的HK-2细胞过表达模型，通过Western blot验证候选成分对URAT1/GLUT9的调控作用。

研究结果部分：

1. XOD抑制活性筛选：通过96孔板法测定发现CF60的IC₅₀为30.9 μg/mL，显著优于其他极性部位。
2. 活性成分鉴定：UF-UPLC/MS从CF60中锁定9个潜在XOD结合成分，经标准品比对确认TRG、TEG和PGG三种没食子酰葡萄糖衍生物。
3. 酶抑制机制：Lineweaver-Burk双倒数作图显示三者均为混合型可逆抑制剂，PGG的抑制常数K_i最低(0.24 μM)，且优先结合游离XOD。
4. 分子对接：三者与XOD的FAD区域结合能(-10.1至-11.2 kcal/mol)强于MPT区域，通过氢键与ARG426、GLU263等关键残基作用，阻断电子传递。
5. 转运体调控：在800 μM尿酸刺激的HK-2细胞中，PGG(50 μg/mL)使URAT1和GLUT9蛋白表达分别降低62.3%和58.7%，呈现剂量依赖性。

这项研究首次系统阐明了TFTS治疗高尿酸血症的"双管齐下"机制：TRG/TEG/PGG既能通过占据XOD的FAD活性中心抑制尿酸生成（IC₅₀ 6.58-54.46 μg/mL），又可下调URAT1/GLUT9表达促进尿酸排泄。特别值得注意的是，PGG的降尿酸效能显著优于文献报道的其他植物成分，其多酚羟基结构与XOD的极性结合口袋形成稳定氢键网络，这为设计新型XOD/URAT1双靶点抑制剂提供了模板。从传统药物中挖掘多靶点先导化合物的研究策略，不仅为破解藏药现代化难题树立典范，更为开发兼具疗效和安全性的抗高尿酸血症药物开辟了新途径。