综述：免疫-PCR技术的进展及其在传染病诊断中的应用

这篇综述系统阐述了免疫-PCR（I-PCR）技术的演进与临床应用，该技术通过融合免疫分析（ELISA）的特异性和聚合酶链反应（PCR）的扩增能力，实现了飞克级（fg）超敏检测。文章重点剖析了链霉亲和素-生物素系统、纳米颗粒扩增、磁珠辅助形式等关键技术突破，及其在病毒（如HIV、SARS-CoV-2）、细菌（如结核分枝杆菌）、寄生虫等病原体检测中的卓越表现。尽管存在操作复杂、依赖热循环仪等临床转化瓶颈，作者提出通过等温扩增、多重POCT（床旁检测）平台等创新方向推动技术革新。

　　

免疫-PCR技术的进化之路（1992–1993）
1992年，Sano团队首次建立免疫-PCR（I-PCR）技术，其检测牛血清白蛋白（BSA）的灵敏度较传统ELISA提升10⁵倍。这项突破性技术采用链霉亲和素-蛋白A嵌合体作为桥梁，将DNA标记物与抗体偶联，开创了免疫检测与核酸扩增联用的先河。

免疫-PCR的检测模式与读谱策略
现代I-PCR已发展出直接法、间接法、夹心法等多种形式，其中夹心I-PCR通过捕获抗体-抗原-检测抗体的"三明治"结构显著提升特异性。实时荧光定量PCR（qPCR）和数字PCR（dPCR）的引入，使检测限低至10^-18摩尔级别。磁珠分离技术的应用则有效降低了背景噪音。

病毒抗原检测的突破
在HIV诊断中，I-PCR对p24抗原的检测灵敏度达到0.01 pg/mL，远超第四代ELISA。针对SARS-CoV-2，采用纳米金标记的I-PCR可在症状出现前3天检出病毒核衣壳蛋白，为早期干预赢得宝贵时间。登革热NS1抗原的检测限更是突破至50 fg/mL，有效解决了血清型交叉反应难题。

抗体检测的新纪元
弓形虫（T. gondii）IgG抗体的I-PCR检测，其灵敏度是ELISA的1000倍。莱姆病螺旋体（B. burgdorferi）抗体的检测中，I-PCR成功识别出ELISA假阴性样本，这对血清学"窗口期"诊断具有革命性意义。

实验室医学的挑战与创新
当前I-PCR面临DNA-抗体偶联效率低、热循环依赖等瓶颈。新兴的等温扩增技术（如LAMP）与微流控芯片的结合，有望开发出便携式诊断设备。石墨烯量子点标记和CRISPR-Cas系统联用，则可能将检测灵敏度推向阿托摩尔（aM）级别。

结论
历经32年发展，I-PCR已从实验室走向临床验证阶段。随着自动化工作站和冻干试剂的发展，这项技术有望成为下一代POCT的核心平台，特别是在资源有限地区的新发传染病防控中发挥关键作用。