贝类寄生虫Perkinsus olseni的分离培养与最适生长条件优化研究

为解决贝类寄生虫Perkinsus olseni体外培养技术不足的问题，研究人员通过优化Ray’s流体硫乙醇酸盐培养基（RTFM）和DMEM/F12培养体系，成功建立其体外培养方法，揭示其最适生长温度为22°C，并发现宿主血淋巴可促进游动孢子释放。该研究为贝类帕金森病（Perkinsosis）的防控提供了关键技术支撑。

　　

贝类养殖业正面临帕金森病（Perkinsosis）的严峻威胁，这种由Perkinsus属寄生虫引发的疾病已导致全球多地贝类大规模死亡。其中，Perkinsus olseni（P. olseni）因感染30余种贝类宿主且被世界动物卫生组织（WOAH）列为法定报告疾病而备受关注。尽管该寄生虫在新西兰绿唇贻贝（Perna canaliculus）中检出率逐年上升，但其体外培养体系尚未建立，严重阻碍了致病机制研究和防控技术开发。

新西兰Cawthron研究所的Lizenn Delisle团队在《International Journal for Parasitology》发表研究，通过优化国际标准方法，首次成功建立P. olseni的体外培养体系。研究人员从绿唇贻贝中分离寄生虫，采用含抗生素的Ray’s流体硫乙醇酸盐培养基（RTFM）初培养，转至DMEM/F12培养基扩增，并通过内转录间隔区（ITS）测序验证菌株同源性（100%匹配）。关键技术包括：宿主血淋巴刺激游动孢子释放、温度梯度实验（20-35°C）确定最适生长条件、冷冻保存及复苏验证。

研究结果
Mussels
从新西兰尼尔森地区养殖场采集的绿唇贻贝中，通过RTFM培养检出P. olseni感染（检出率35-60%），组织学显示寄生虫主要分布于消化腺周围结缔组织。

Perkinsus infection and histopathology
寄生虫呈现典型生活史阶段：滋养体（trophozoites）、休眠孢子（hypnospore）和游动孢子囊（zoosporangia）。发现疑似营养匮乏诱导的新型繁殖方式——类滋养体细胞直接转化为游动孢子样细胞。

Discussion

1. 培养优化：宿主血淋巴显著促进游动孢子囊成熟（p<0.05）；
2. 温度适应性：22°C时增殖最快，35°C时完全抑制，证实其热极限为30°C < T ≤ 35°C；
3. 应用价值：冷冻保存细胞复苏后存活率达90%，为建立寄生虫库奠定基础。

该研究不仅填补了P. olseni体外培养技术空白，更揭示了温度升高可能加剧寄生虫传播的生态风险（海水温度>20°C时感染强度显著增加）。建立的培养体系为后续研究宿主-寄生虫互作、开发抗帕金森病策略提供了不可替代的平台，对保障全球贝类养殖业可持续发展具有重要战略意义。