胸腺来源调节性T细胞的临床级扩增方案：为儿童心脏移植提供新型免疫治疗策略

为解决儿童心脏移植后免疫排斥难题，英国研究团队开发了胸腺来源调节性T细胞(Thy-Tregs)的GMP标准化扩增方案。通过优化机械分离技术、CTS Dynabeads激活系统和分阶段刺激策略，成功实现Thy-Tregs超200倍的扩增，并验证了冻存后仍保持>95%活性和>80% FOXP3+稳定性。该研究为ATT-Heart临床试验提供了可靠细胞产品，推动Treg疗法在实体器官移植中的应用。

　　

在器官移植领域，如何诱导免疫耐受始终是科学家们追逐的圣杯。尽管调节性T细胞(Treg)疗法在动物模型中展现出惊人潜力，但临床转化面临巨大挑战——外周血Treg数量稀少、扩增效率低下，且表型稳定性难以保证。更令人困扰的是，现有扩增方案存在批次差异大、成本高昂等问题，严重制约了Treg疗法的广泛应用。

英国伦敦大学学院的研究团队另辟蹊径，将目光投向了儿科心脏手术中常规切除的胸腺组织。这些"医疗废弃物"实则蕴藏着宝藏：胸腺来源的Treg(Thy-Treg)不仅纯度高、表型均一，还具有更强的稳定性。研究团队在《Journal of Translational Medicine》发表的成果中，系统性地建立了从组织处理到细胞冻存的完整GMP生产体系。

研究采用机械分离结合两步磁珠分选技术（CD8⁺去除+CD25⁺富集），通过对比不同激活方案，最终选定CTS Dynabeads Treg Xpander作为核心激活试剂。借助G-Rex生物反应器，配合雷帕霉素和IL-2的协同作用，建立了10-23天的弹性扩增周期。关键创新在于优化了再刺激时间点，并开发出可控速率冷冻方案。

临床级胸腺组织消化分离Thy-Tregs
研究发现仅用GentleMACS解离器（无需酶消化）即可获得平均4.54×10⁶ Tregs/克组织，较传统方法提高2.25倍。工程化验证显示该法完全符合GMP要求，且保持>75%的CD25⁺FOXP3⁺纯度。

CTS Dynabeads优于TransAct的扩增效能
对比实验显示，CTS组扩增倍数显著高于TransAct（P<0.05），且能更好维持CD62L、CXCR4等归巢受体表达。更重要的是，CTS扩增的Thy-Tregs抑制功能更强，在1:1比例下可抑制90%效应T细胞增殖。

小规模验证Thy-Treg扩增方案
24天培养后Thy-Tregs纯度达90%（起始73.2%），平均扩增>75倍。G-Rex系统中，第10天再刺激的方案使扩增效率提升2.4倍，验证了"静息期再刺激"的理论优势。

放大生产工艺验证
两个工艺验证批次和全规模工程批次的数据显示：23天扩增倍数达230-3127倍，最终产品含>90% FOXP3⁺细胞。磁珠去除虽导致细胞损失（3.7%-25.6%），但冻存12月后仍满足MHRA释放标准（存活率>70%，TSDR去甲基化>80%）。

冻存产品的稳定性
在Th17极化条件下，冻存Thy-Tregs仍保持FOXP3高表达，且几乎不分泌IL-2、IFN-γ或IL-17。关键指标检测证实，不同收获时间点（10/17/23天）的产品质量高度一致。

这项研究的意义不仅在于建立了首个覆盖0.5-16岁患儿的Treg治疗方案，更开创性地解决了三个行业痛点：通过胸腺取材突破细胞来源限制，利用标准化工艺保证产品一致性，开发冷冻方案实现"现货供应"。ATT-Heart临床试验（ISRCTN15374803）的推进，将验证该方案在预防移植排斥中的实际价值。更长远来看，这种GMP平台可延伸至GVHD、自身免疫病等领域，为Treg疗法的产业化树立了新标杆。