房水肿瘤DNA检测揭示高风险葡萄膜黑色素瘤的分子特征与预后价值

为解决葡萄膜黑色素瘤(UM)传统组织活检侵入性强、血液cfDNA检出率低的问题，德国埃森大学医院团队通过前瞻性队列研究，首次系统评估房水(AH)和玻璃体(VB)液体活检的临床价值。研究发现49%患者眼内液体中可检出肿瘤DNA，且AH阳性与单染色体3缺失(M3)显著相关(p=0.0016)，为UM微创预后分层提供了新策略。

　　

葡萄膜黑色素瘤(UM)作为成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，约半数患者会发生致命性转移。尽管染色体3状态(M3/D3)和GNAQ/GNA11突变已被确立为关键预后指标，但传统组织活检在保眼治疗患者中面临视网膜脱离等风险，而血液循环肿瘤DNA(ctDNA)在初诊时检出率不足31%。这种临床困境催生了寻找更优液体活检来源的迫切需求。

德国埃森大学医院Nicole Barwinski领衔的多学科团队，在《Scientific Reports》发表了一项开创性研究。该团队前瞻性收集96例UM患者的房水(AH)和玻璃体(VB)样本，采用深度扩增子测序(平均测序深度120,000×)检测GNAQ/GNA11突变，结合微卫星分析(MSA)确定染色体3状态，系统评估了眼内液体活检的可行性及其与临床特征的关联。

关键技术包括：1) 术中采集84例AH和92例VB样本；2) QIAmp试剂盒提取cfDNA；3) 针对GNAQ/GNA11密码子209/183设计双重PCR扩增；4) Illumina MiniSeq平台超深度测序；5) 自建生物信息学流程设定GNA11/GNAQ突变阈值分别为0.3%/0.5%。

研究结果揭示：

1. 肿瘤DNA检出率：49%(43/88)患者在至少一种眼内液体中检出肿瘤DNA，VB阳性率(43%)显著高于AH(24%)，16例患者双阳性。
2. 分子特征关联：AH阳性样本中91%(19/21)源自M3肿瘤，与D3组差异极显著(p=0.0016)，而VB无此选择性(p=0.2564)。
3. 定量分析：检测到VAF高达50%(中位数VB 10.4% vs AH 9.7%)，远超血液ctDNA的2%上限。
4. 临床相关性：肿瘤大小(LBD)、睫状体侵犯等解剖因素与检出率无显著关联，提示生物学特性(如M3)而非物理接触主导DNA释放。

讨论部分指出，该研究首次证实：

1. 眼内液体活检可规避传统活检风险，为49%初诊患者提供分子分析材料；
2. AH与M3的特异性关联可能反映高侵袭性UM的独特生物学(如血-房水屏障破坏或肿瘤细胞迁移能力增强)；
3. 二次摘除病例中持续检出肿瘤DNA(2.54% VAF)提示其可用于复发监测。

这项研究为UM精准医疗开辟了新路径：通过微创眼内液体活检实现风险分层，尤其AH阳性可能作为M3的替代标志物。未来需扩大队列验证AH与转移风险的直接关联，并探索将BAP1突变、8q扩增等分子事件整合入液体活检panel。该成果对优化UM患者随访策略和辅助治疗决策具有重要临床意义。