独活多糖APRP50-2-1的结构表征及其通过调控BCL-2/BAX通路抑制类风湿性关节炎的机制研究

【编辑推荐】本研究针对类风湿性关节炎(RA)现有疗法副作用大、疗效有限的问题，从传统中药独活（Angelica pubescens）中提取纯化多糖APRP50-2-1，通过CIA大鼠模型和MH7A细胞实验证实其能显著抑制关节肿胀，并通过下调BCL-2/上调BAX促进滑膜细胞凋亡，为开发新型RA治疗药物提供了天然多糖候选分子。

　　

类风湿性关节炎(RA)作为一种慢性自身免疫性疾病，正困扰着全球约1%的人口。这种疾病不仅会导致关节畸形和残疾，还会引发心血管并发症，给患者和社会带来沉重负担。当前临床常用的非甾体抗炎药(NSAIDs)和糖皮质激素虽能缓解症状，却无法阻止疾病进展，且长期使用可能产生严重副作用。在传统中药宝库中，伞形科植物独活(Angelica pubescens)因其"祛风除湿"的功效被长期用于关节炎治疗，但其活性成分多糖的抗RA机制仍是未解之谜。

广东药科大学的研究团队在《International Journal of Biological Macromolecules》发表的研究，首次系统揭示了独活多糖的结构特征及其抗RA的分子机制。研究人员采用水提醇沉法从独活根部分离出4种粗多糖(APR50/70/90/RB)，通过胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠模型筛选发现APR50抗炎效果最佳，其抑制足爪肿胀的效果与临床常用药甲氨蝶呤相当。进一步采用DEAE-Cellulose 52和Sephadex G-75柱层析从APR50中纯化得到均一多糖APRP50-2-1，运用红外光谱(FT-IR)、核磁共振(NMR)等技术解析其结构为以→4)-α-D-Glc^p-(1→为主链，含→6)-α-D-Glc^p-(1→等特殊连接方式的葡聚糖，分子量9.1 kDa。

关键技术包括：1) CIA大鼠模型构建与药效评价；2) 多糖分级纯化与结构解析技术；3) MH7A人滑膜细胞增殖/凋亡实验；4) Western blot检测BCL-2/BAX蛋白表达。

【材料与方法】研究团队从四川峨眉山采购道地独活药材，通过水提醇沉获得4种粗多糖。采用完全弗氏佐剂乳化牛II型胶原建立CIA大鼠模型，通过足容积测量、关节炎指数(AI)评分评估药效。

【结构表征】APRP50-2-1经HPLC检测为单一对称峰，气相色谱显示其由葡萄糖(82.3%)、甘露糖(9.7%)等组成。核磁共振氢谱(¹H NMR)在δ 5.38/5.12处出现典型α型糖苷键信号，碳谱(¹³C NMR)在δ 102.3处显示C-1特征峰，结合二维HSQC谱确认其含有→6,4)-α-D-Gal^p-(1→等特殊结构。

【药效评价】在CIA大鼠中，APR50治疗组足肿胀度较模型组降低47.2%(P<0.01)，组织病理显示其显著抑制滑膜增生和软骨破坏。APRP50-2-1可剂量依赖性抑制MH7A细胞增殖(IC₅₀ 312 μg/mL)，通过上调BAX/Bcl-2比值至2.83倍诱导细胞凋亡。

【讨论与结论】该研究首次阐明独活多糖通过调控凋亡关键蛋白BCL-2/BAX发挥抗RA作用，其结构特征与活性的关联为多糖类药物设计提供了新思路。特别值得注意的是，APRP50-2-1中独特的→6,4)-α-D-Gal^p-(1→分支结构可能是其生物活性的结构基础。这项研究不仅验证了传统中药的现代科学价值，更为开发低毒高效的RA治疗药物提供了候选分子，具有重要的临床转化前景。