CRISP3-PSP94复合物通过CITED2调控P2RX7信号通路影响前列腺癌免疫微环境的机制研究

本研究针对前列腺癌中CRISP3与PSP94的逆向表达模式及其与免疫微环境的关联，揭示了CRISP3-PSP94复合物通过转录共调节因子CITED2调控P2RX7介导的炎症信号通路的新机制。研究人员发现CRISP3单独下调P2RX7可减少ATP诱导的细胞毒性和IL-1β分泌，而PSP94能逆转此效应，并影响CRISP3的内吞作用。该研究为前列腺癌免疫治疗提供了新靶点，论文发表于《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Cell Research》。

　　

研究背景与意义
前列腺癌是全球男性高发的恶性肿瘤，其进展与肿瘤微环境中的免疫调控密切相关。CRISP3（富含半胱氨酸分泌蛋白3）和PSP94（94氨基酸前列腺分泌蛋白）这对"分子搭档"展现出有趣的生物学特性：在前列腺癌中呈现逆向表达模式——CRISP3上调而PSP94下调，且与不良预后显著相关。更引人注目的是，CRISP3在具有高免疫风险特征的前列腺癌簇中过表达，暗示其可能参与塑造肿瘤免疫微环境。然而，这对蛋白复合物如何影响免疫细胞功能、特别是与炎症反应关键受体P2RX7（嘌呤能受体X7）的调控关系，始终是未解之谜。

印度医学研究委员会的科研团队通过系统的分子细胞生物学研究，首次阐明了CRISP3-PSP94-P2RX7信号轴通过转录共调节因子CITED2发挥作用的分子机制。研究发现，游离的CRISP3能显著下调P2RX7表达，从而减轻ATP诱导的细胞死亡和IL-1β分泌；但当CRISP3与PSP94形成复合物时，这种调控作用被完全阻断。这一发现不仅解释了前列腺癌中CRISP3/PSP94失衡的病理意义，更为靶向肿瘤相关巨噬细胞的免疫治疗提供了新思路。

关键技术方法
研究采用CRISP3基因敲除的LNCaP细胞系（KD-E2和KD-E11）和THP1巨噬细胞模型，通过RNA-Seq分析50例前列腺癌临床样本验证基因表达相关性。运用重组人CRISP3（rhCRISP3）处理、抗体芯片筛选、CUT&RUN（染色质切割分离技术）检测p300在P2RX7启动子的结合，结合流式细胞术、ELISA和共聚焦显微镜等技术系统解析分子机制。

研究结果

1. CRISP3调控前列腺癌细胞中P2RX7水平
在CRISP3敲除的LNCaP细胞中，P2RX7 mRNA和蛋白表达分别升高3倍和2倍。临床数据分析显示前列腺癌组织中CRISP3与P2RX7呈显著负相关。外源性rhCRISP3处理可使PC3细胞的P2RX7蛋白降低60%，并减少ATP诱导的PI⁺细胞比例（从40%降至15%）。

2. PSP94拮抗CRISP3对P2RX7的调控
当rhCRISP3与PSP94形成复合物时，其对P2RX7的下调作用完全消失。PSP94还通过改变CRISP3与脂筏标记蛋白flotillin-2的相互作用，促进CRISP3内吞。在LPS+ATP刺激的THP1巨噬细胞中，CRISP3使IL-1β分泌量降低50%，而CRISP3-PSP94复合物处理组恢复至对照组水平。

3. CITED2介导CRISP3的信号传导
抗体芯片筛选发现转录共调节因子CITED2是CRISP3下游效应分子。过表达CITED2可使P2RX7降低70%，且CUT&RUN证实CRISP3通过减少p300在P2RX7启动子的结合来抑制转录。这种调控在肿瘤细胞和巨噬细胞中均存在。

结论与展望
该研究首次描绘出"CRISP3-PSP94-CITED2-P2RX7"信号轴的完整调控网络：在前列腺癌微环境中，过表达的CRISP3通过上调CITED2竞争性消耗p300，从而抑制P2RX7转录；而PSP94作为天然拮抗剂，通过形成复合物阻断这一过程。这一发现具有双重意义：一方面解释了CRISP3/PSP94比值作为前列腺癌预后标志物的分子基础；另一方面提示通过靶向该通路调控P2RX7介导的炎症反应，可能成为增强肿瘤免疫治疗的新策略。特别值得注意的是，该机制在肿瘤细胞和肿瘤相关巨噬细胞中同时存在，为开发微环境重塑疗法提供了理论依据。