高通量筛选平台提升Phi29 DNA聚合酶在高盐条件下的滚环扩增效率

为解决天然Phi29 DNA聚合酶(Phi29 Pol)在高盐环境中扩增活性不足的问题，研究人员开发了一种基于微滴荧光检测的高通量筛选方法，成功获得RCA效率提升1.39倍的突变体S6，为第三代测序技术(DNA nanoball-based sequencing)提供了高效酶改造方案。

　　

Phi29 DNA聚合酶(Phi29 Pol)作为第三代测序技术(如DNA纳米球测序)的核心工具，其天然版本在300 mM KCl等高盐环境下扩增效率低下。传统酶改造依赖费时费力的试错过程，而这项研究创新性地建立了微滴荧光检测系统——通过核酸凝胶染料将滚环扩增(RCA)效率转化为荧光信号，首次实现Phi29 Pol突变体的高通量分选。经筛选获得的S6突变体在300 mM KCl条件下，RCA效率达到初始酶M2的1.39倍。该平台为开发适应特殊测序场景的高性能聚合酶提供了全新解决方案。