双苄基异喹啉生物碱通过破坏内体酸化抑制流感病毒复制的机制研究

针对流感病毒快速变异和耐药性难题，中国医学科学院研究人员聚焦双苄基异喹啉生物碱(BBAs)，发现CEP、TET等五种化合物通过靶向病毒生命周期早期阶段，破坏内体酸化(pH 5.0-5.5)抑制病毒基因组释放，显著降低小鼠肺组织病毒载量并改善病理损伤，为开发广谱抗流感药物提供新策略。

　　

流感病毒因其高突变率和跨物种传播能力，持续威胁全球公共卫生。尽管疫苗接种是主要预防手段，但病毒抗原漂移和抗原转换导致疫苗保护力有限。现有神经氨酸酶抑制剂(如奥司他韦)和帽依赖性核酸内切酶抑制剂(如巴洛沙韦)面临耐药性挑战，亟需针对新作用机制的药物。

中国医学科学院医学生物技术研究所的研究团队在《Virology Journal》发表研究，发现双苄基异喹啉生物碱(BBAs)可通过干扰内体酸化抑制流感病毒复制。研究人员采用CPE抑制实验筛选出五种活性化合物，其中CEP(cepharanthine)表现最优，对H1N1和H3N2亚型的IC₅₀
分别为3.10±0.72μM和3.25±0.07μM。通过时间进程实验证实BBAs作用于病毒进入早期阶段，LysoTracker检测显示其显著升高内体pH值(从5.0-5.5升至近中性)，阻止病毒核糖核蛋白(vRNP)从晚期内体释放。动物实验证实20 mg/kg CEP处理使感染PR8株的小鼠肺指数降低42%，病理损伤显著改善。

关键技术包括：1)CPE抑制实验筛选抗病毒活性；2)RT-qPCR和Western blot检测病毒PB2、M1蛋白表达；3)免疫荧光观察NP蛋白核定位；4)LysoTracker标记酸性细胞器；5)小鼠模型评估肺组织病毒载量(NS1蛋白检测)和病理(H&E染色)。

BBAs抑制IAV和IBV复制
通过剂量梯度实验证实CEP、TET、FCN在MDCK和A549细胞中呈浓度依赖性抑制H1N1 PB2 mRNA表达(>80%抑制率)，Western blot显示病毒蛋白合成受阻。对奥司他韦耐药株(H1N1)和金刚烷胺耐药株(H3N2)同样有效，10μM浓度下抑制率>70%。

靶向病毒生命周期早期阶段
时间加药实验显示，0-2小时给药组抑制效果与全程给药组相当，证实BBAs作用于病毒内化阶段。病毒结合/内化实验表明BBAs不影响病毒附着，但免疫荧光显示CEP处理组NP蛋白在核周区积累，与LAMP1标记的晚期内体共定位。

破坏内体酸化机制
LysoTracker检测发现BBAs处理组荧光强度降低56%，与内体酸化抑制剂BafA1效果相当，证实其通过升高内体pH值阻断HA蛋白介导的膜融合。

CEP体内抗病毒活性
感染3天后，CEP(20 mg/kg)组肺组织NP mRNA降低2.1个对数级，病理切片显示肺泡渗出减少，疗效与27.5 mg/kg奥司他韦相当。

该研究首次阐明BBAs通过宿主靶向机制抑制流感病毒，其独特的多环结构可同时干扰内体酸化和炎症反应。CEP作为临床已用药物，具有转化应用潜力。未来可通过纳米递送系统优化其肺部靶向性，为应对流感大流行提供新选择。