WNT3通过调控ABCG2表达促进口腔鳞状细胞癌对奥沙利铂的化疗耐药性

本研究针对口腔鳞状细胞癌（OSCC）奥沙利铂（OXA）耐药机制展开探索，揭示了WNT3通过激活经典WNT/β-catenin信号通路，增强转录因子LEF1与ABCG2启动子结合，从而上调ABCG2表达并促进药物外排的分子机制。研究人员通过建立耐药细胞模型、RNA测序和功能实验，证实靶向WNT/β-catenin通路抑制剂MSAB可逆转耐药性，为克服OSCC化疗耐药提供了新靶点。

　　

研究背景与意义
口腔鳞状细胞癌（OSCC）作为头颈部最常见的恶性肿瘤，其治疗长期面临化疗耐药的严峻挑战。奥沙利铂（OXA）作为一线铂类化疗药物，通过引起DNA损伤发挥抗肿瘤作用，但耐药性的出现显著降低其临床疗效。传统研究多聚焦于DNA损伤修复机制，然而福建医科大学附属口腔医院的研究团队发现，ABC转运蛋白家族成员ABCG2（乳腺癌耐药蛋白，BCRP）的表达异常与药物外排能力增强密切相关，但其上游调控机制尚未阐明。

研究方法与技术路线
研究团队通过长期低浓度诱导建立了三种OSCC耐药细胞系（CAL27/OXA、HN30/OXA、HN6/OXA），采用RNA测序（GSE248792）筛选出ABCG2和WNT通路关键分子。实验技术包括：CCK-8检测细胞活力、CFDA-SE荧光示踪和HPLC定量药物蓄积、TOP/FOP荧光素酶报告基因检测通路活性、染色质免疫沉淀（ChIP）验证LEF1与ABCG2启动子结合，以及小分子抑制剂MSAB的协同效应评估。

主要研究结果

1. 耐药细胞模型的建立与表征
   通过12个月梯度诱导建立的耐药细胞显示：IC₅₀
   值提升3-5倍（P<0.01），细胞形态呈现间质样改变，迁移侵袭能力增强（P<0.01），且凋亡率显著降低（P<0.01）。

   

2. ABCG2介导的药物外排机制
   RNA测序显示ABCG2在耐药细胞中表达上调2.1倍（P_adj
   <0.05），CFDA-SE和HPLC证实其外排效率提升40%（P<0.001）。siRNA沉默ABCG2可使细胞内OXA浓度恢复至敏感细胞水平（P<0.01），并逆转耐药性。

3. WNT3/β-catenin通路的异常激活
   免疫荧光和核质分离实验显示β-catenin核转位增加3倍（P<0.001），TOP/FOP活性升高2.5倍（P<0.01）。过表达WNT3可重现耐药表型，而siWNT3则使IC₅₀
   降低58%（P<0.001）。

   

4. LEF1介导的转录调控
   ChIP-qPCR证实WNT3促进LEF1与ABCG2启动子区（-1582~-1357bp）结合效率提升4倍（P<0.001），MSAB处理可阻断该效应并使耐药细胞恢复对OXA敏感性（CI=0.72）。

结论与展望
该研究首次阐明WNT3-β-catenin-LEF1-ABCG2轴在OSCC奥沙利铂耐药中的核心作用，突破传统DNA修复机制的认知框架。临床转化方面，MSAB与OXA联用显示显著协同效应（CI<1），为逆转耐药提供新策略。未来研究需在PDX模型和临床样本中验证该通路的靶向治疗价值，并探索WNT3表达水平作为疗效预测标志物的可能性。