呼吸道微生物组研究是理解慢性肺部疾病的关键，但痰液样本常因混入上呼吸道成分导致数据偏差。尤其在儿童哮喘领域，微生物群落差异细微，样本质量控制成为核心挑战。现有标准多针对炎症细胞分析，缺乏统一微生物评估标准，不同研究采用的鳞状细胞比例阈值从10%到80%不等，严重影响结果可比性。

新西兰惠灵顿的研究团队在《Respiratory Research》发表论文，首次系统评估痰液质量指标对微生物组分析的影响。研究纳入170名8-14岁儿童（130例哮喘），通过诱导痰采集样本，采用四重质量评估体系：鳞状细胞比例（≥30%为不合格）、细胞活性（<50%为不合格）、痰栓可见性、唾液α-淀粉酶水平（≥7.5 U/mL为不合格）。微生物组分析采用V1-V3区16S rRNA测序和qPCR定量，通过Bray-Curtis相似性分析和LEfSe方法比较组间差异。

主要技术方法包括：1）多参数痰液质量评估（细胞学/生化指标）；2）16S rRNA基因V1-V3区扩增子测序；3）qPCR定量细菌负荷；4）PERMANOVA多变量统计分析。样本来自新西兰社区招募队列。

【痰液特征】
研究发现19%-29%样本不合格，四指标间一致性较高（49.1%样本全合格）。唾液α-淀粉酶与其他指标一致性最低，12例样本出现矛盾判断。鳞状细胞比例与微生物组差异关联性最强（PERMANOVA pseudo-F=3.13），不合格样本细菌负荷显著增高（p=0.0057），富含Rothia等口腔菌。

【微生物组差异】
全样本分析未发现哮喘-非哮喘差异（p=0.11），但排除53例鳞状细胞≥30%样本后，哮喘组Haemophilus（H. influenzae）、Gemella和Granulicatella显著富集（LDA>3）。敏感性分析显示20%/25%鳞状细胞阈值同样有效，但其他指标单独应用无效。

【讨论与意义】
该研究确立30%鳞状细胞比例作为微生物组研究的黄金标准，首次在质量控制后揭示儿童哮喘特异性微生物特征。Haemophilus的发现为靶向治疗提供依据，其与难治性哮喘的关联已在成人azithromycin治疗响应预测中得到验证。研究创新性在于：1）建立可操作的痰液质量分级体系；2）证明质量控制对微弱生物学信号的放大作用；3）提出唾液α-淀粉酶适用于冻存样本但特异性不足。

局限性包括缺乏配对上下呼吸道样本验证，且未探索动态采样。未来可扩展至其他呼吸道疾病，并开发计算去污染算法。该成果为微生物组研究的标准化提供范式，尤其适用于儿童等采样困难群体。