高效CRISPR/Cas9多重基因组编辑新方法：水稻中超克隆技术的突破

《Journal of Plant Biology》：Hyper Cloning: A High-Efficiency Method for CRISPR/Cas9 Multiplex Genome Editing in Rice

为解决植物基因冗余导致的复杂功能分析难题，研究人员开发了基于CRISPR/Cas9系统的"超克隆(Hyper Cloning)"技术。该方法通过优化聚顺反子tRNA-gRNA(PTG)阵列载体pRGEB32t的组装策略，将所需片段数量减少，显著提升3-5个靶点CRISPR载体的构建效率，为水稻多重基因编辑提供了更高效的解决方案。

植物普遍存在基因冗余现象，这给功能基因组研究带来挑战——往往需要同时敲除多个基因才能解析其生物学功能。在水稻研究中，搭载聚顺反子tRNA-gRNA(PTG)阵列的CRISPR/Cas9系统已成为多重基因编辑的利器。

此前科研团队开发的"快速克隆(Speed Cloning)"方法，通过Gibson组装技术成功构建了串联tRNA-gRNA结构的CRISPR/Cas9载体。而最新研发的"超克隆(Hyper Cloning)"技术则更胜一筹：巧妙利用pRGEB32t载体中原本在快速克隆体系中失活的gRNAs，大幅减少了组装所需的DNA片段数量。实验数据证实，该方法在3个、4个乃至5个靶点的CRISPR载体构建中都展现出更高的效率。

这项技术突破使得串联tRNA-gRNA结构的CRISPR/Cas9载体构建更加高效便捷，为植物特别是水稻的多重基因组编辑研究提供了强有力的工具。