靶向Wnt/β-catenin通路增强胆管癌化疗敏感性的机制与临床转化研究

本研究针对胆管癌(CCA)化疗耐药难题，创新性探索Wnt/β-catenin通路抑制剂(C59/XAV939/PRI724)联合标准化疗方案(5-FU/顺铂/吉西他滨)的协同效应。通过体外基因沉默和体内大鼠模型证实，通路抑制可显著下调RRM1/TYMS等耐药基因，上调SLC28A3/UPP1等敏感基因，使肿瘤体积缩小50%以上。该研究为克服CCA临床耐药提供了新策略，相关成果发表于《Biomedicine》。

　　

胆管癌(Cholangiocarcinoma, CCA)作为第二常见的肝胆恶性肿瘤，其五年生存率不足5%，化疗耐药是治疗失败的主因。尽管以顺铂联合吉西他滨(Cis/Gem)为基础的一线方案已应用十余年，但患者中位生存期仍难以突破12个月。近年研究发现，Wnt/β-catenin信号通路在CCA中异常激活，不仅驱动肿瘤进展，更可能通过调控多药耐药(MDR)相关基因导致治疗失败。然而，该通路如何具体影响CCA耐药表型，以及靶向干预能否逆转耐药，仍是亟待解决的科学问题。

针对这一关键问题，西班牙卡斯蒂利亚-莱昂健康研究所联合英国爱丁堡大学的研究团队开展了系统研究。通过整合基因沉默、药物抑制和动物模型等多维度证据，首次阐明Wnt/β-catenin通路通过调控"耐药组"(resistome)中SLC28A3/RRM1/TYMS等关键基因表达影响CCA化疗敏感性。相关成果发表在《Biomedicine》杂志，为临床逆转耐药提供了新思路。

研究采用三大关键技术：1）shRNA介导的β-catenin基因沉默构建稳定转染细胞系；2）TaqMan低密度芯片(TLDA)全面分析94个耐药相关基因表达谱；3）硫代乙酰胺(TAA)诱导的大鼠CCA模型进行体内验证。通过MTT法检测细胞活力，结合SynergyFinder软件评估药物协同效应。

3.1 β-catenin沉默增强抗肿瘤药物敏感性
通过构建EGI-1-shβ-catenin稳转细胞系，证实β-catenin敲除可使 survivin表达降低60%，同时使吉西他滨IC₅₀
值下降3倍。TLDA分析显示耐药组基因发生显著重编程，包括SLC28A3(CNT3)上调7倍，ABCC3(MRP3)下调5倍，这些改变共同增强了细胞对5-FU的敏感性。

3.2 Wnt/β-catenin抑制减少CCA细胞增殖
三种通路抑制剂均显示剂量依赖性抗增殖效果，其中转录抑制剂PRI724效果最强(IC₅₀
<1μM)。值得注意的是，不同解剖来源的CCA细胞对抑制剂敏感性存在差异：肝内型(iCCA)细胞对XAV939更敏感，而肝外型(eCCA)细胞对C59反应更佳。

3.3 Wnt/β-catenin抑制诱导耐药组改变
0.3μM PRI724处理24小时即导致TYMS(胸苷酸合成酶)表达降低70%，DHFR(二氢叶酸还原酶)下降65%。特别在CC-LP1细胞中，RRM1(核糖核苷酸还原酶M1)下调与吉西他滨增敏直接相关，这为临床联合用药提供了分子标志物。

3.4 Wnt/β-catenin抑制增强CCA细胞药物敏感性
协同指数分析显示，PRI724与5-FU联用产生显著协同效应(δ-score>10)。在EGI-1细胞中，0.3μM PRI724使5-FU抑制率从35%提升至82%，这种增效作用与UPP1(尿苷磷酸化酶1)上调3.5倍密切相关。

3.5 Wnt抑制在体内增敏化疗
TAA诱导的大鼠模型中，ICG-001(结构类似物)联合5-FU使肿瘤体积缩小58%。病理分析显示联合组肿瘤边界更清晰，纤维间隔更完整。基因检测证实SLC28A3表达增加2.1倍，RRM1降低40%，与体外结果高度一致。

这项研究创新性地揭示了Wnt/β-catenin通路通过多维机制调控CCA耐药的新范式：1）膜转运层面，上调SLC28A3增强药物摄取；2）代谢层面，调控TYMS/UPP1影响5-FU活化；3）DNA修复层面，抑制UNG(尿嘧啶DNA糖苷酶)增强铂类效果。特别值得注意的是，PRI724在0.3μM亚治疗剂量即可显著增敏化疗，这为降低临床毒副作用提供了重要参考。

目前，基于该研究成果的转化应用正在推进：1）PRI724已进入胆道肿瘤II期临床试验；2）SLC28A3/RRM1表达谱可作为预测标志物指导精准用药。尽管存在肠道毒性等挑战，但通过局部给药或纳米载体等新策略，靶向Wnt通路有望成为克服CCA耐药的关键突破口，为改善这一"癌王"的预后带来新希望。