喷雾式自体表皮细胞促进糖尿病全层皮肤创面愈合的实验研究

推荐：本研究针对糖尿病创面愈合难题，通过建立糖尿病猪模型，探究喷雾式自体表皮细胞（含角质形成细胞/成纤维细胞）对全层创面愈合的影响。结果显示该疗法显著提升创面闭合率（100% vs 86.9%）、促进再上皮化（表皮增厚87.0±10.5 μm）并改善血管生成，为糖尿病慢性创面治疗提供新策略。

　　

糖尿病是全球健康危机，约5.37亿患者深受其害，其中12%-25%会发展为糖尿病足溃疡（DFU），每年非创伤性截肢高达20秒一例。高糖环境导致的异常炎症、血管生成减少和细胞外基质（ECM）紊乱，使得糖尿病创面成为临床治疗难点。尽管细胞疗法（如喷雾式自体表皮细胞）在烧伤、慢性创面中已显现潜力，但其在糖尿病创面的作用机制尚不明确。为此，中山大学附属第一医院的研究团队通过糖尿病猪模型，系统评估了该疗法对全层创面愈合的影响，相关成果发表在《Burns》期刊。

研究采用糖尿病Wuzhishan猪模型（n=2，16个创面），通过链脲佐菌素（STZ）诱导高血糖状态。创面随机分为实验组（喷洒自体表皮细胞悬液，含1.92×10⁶
个活细胞/cm²
）和对照组（标准敷料）。主要技术包括：荧光激活细胞分选（FACS）检测细胞活性、免疫组化（IHC）分析Ki-67/整合素-β1表达、双标免疫荧光（CD31/α-SMA）评估血管成熟度，以及实时定量PCR（RT-PCR）检测炎症因子（TNF-α/IL-6）和ECM相关基因（MMP-2/TIMP-1）。

研究结果
3.1 大体观察
实验组创面闭合率在术后21天达100%，显著高于对照组（86.9±5.3%）。再上皮化表现为表皮厚度增加（87.0±10.5 μm vs 70.3±9.2 μm）和网嵴数量增多（7.8±0.89个/mm vs 5.5±1.1个/mm），Masson染色显示胶原纤维排列更致密。

3.1.2 炎症反应
RT-PCR显示实验组促炎因子（TNF-α/IL-1β/IL-6）表达显著降低，抗炎因子IL-10上调，表明该疗法可调控创面微环境。

3.1.3 血管生成
免疫荧光显示实验组微血管密度（MVD）和血管周细胞覆盖率（MPI）显著提高，术后7天增殖毛细血管指数（PCI）达峰值，提示早期促血管生成作用。

3.2 细胞增殖与再生
IHC显示实验组基底层的Ki-67和整合素-β1表达增强，ELISA检测到生长因子（TGF-β1/VEGF/KGF）水平显著升高，证实细胞悬液通过旁分泌促进组织再生。

3.3 ECM重塑
实验组MMP-2/MMP-9表达下调而TIMP-1上调，胶原Ⅰα mRNA增加，表明ECM重构更接近生理状态。

结论与意义
该研究首次在大型动物模型中证实，喷雾式自体表皮细胞可通过多靶点协同加速糖尿病创面愈合：① 提供活性角质形成细胞直接参与再上皮化；② 通过下调TNF-α/IL-6减轻炎症；③ 促进功能性血管网络形成（CD31⁺
/α-SMA⁺
）；④ 平衡MMPs/TIMP-1改善ECM沉积。尽管急性糖尿病模型与人类慢性创面存在差异，但该疗法展现的“创面质量提升”（如网嵴结构重建）对降低复发率具有潜在价值。未来需结合负压吸引或生物材料进一步优化，并通过延长随访验证长期疗效。