siRNA敲低Cish增强自然杀伤细胞抗胃癌效应的机制研究及免疫治疗潜力

（编辑推荐）本研究通过siRNA敲低自然杀伤细胞（NK）中细胞因子信号抑制因子（CISH），显著增强其对胃癌细胞系（MKN-45/AGS）的杀伤作用，并促进干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌。该策略通过解除IL-15/JAK-STAT通路抑制，为基于NK细胞的实体瘤免疫治疗提供新思路。

　　

优化siRNA递送条件增强NK细胞功能
研究团队首先建立高效siRNA递送体系，采用FAM标记的非靶向siRNA验证转染效率。结果显示，100 nmol/l siRNA联合10 ng/ml IL-15处理时，CD3^-
CD56⁺
NK细胞的荧光强度（MFI）显著提升，且细胞活性不受影响（7-AAD检测存活率>90%）。这一条件被确定为后续实验的标准化方案。

Cish基因敲低效率与时间依赖性
通过qRT-PCR检测发现，IL-15诱导6小时后Cish表达量开始上升，而siRNA处理组在48小时出现41%的基因表达抑制（100 nmol/l浓度）。值得注意的是，双siRNA序列对比实验中，主序列的敲低效果优于次序列（44% vs 36%），证实了靶点设计的特异性。

细胞因子风暴与杀伤效应增强
ELISA数据揭示，Cish敲低的NK细胞与胃癌细胞共培养时，IFN-γ分泌量提升2.1倍（p<0.01），TNF-α增加1.8倍（p<0.05）。这种细胞因子风暴与LDH释放实验的结果相呼应——在10:1的效靶比（E:T）下，MKN-45细胞的死亡率从61.3%跃升至70.3%。流式细胞术进一步证实，CFSE/PI双染的胃癌细胞凋亡率与效应细胞剂量呈正相关。

免疫检查点分子的意外表现
尽管研究预期Cish敲低会降低TIGIT、PD-1等耗竭标志物表达，但流式检测仅显示TIGIT的MFI轻微下降（未达统计学差异）。这一现象提示Cish可能主要通过JAK-STAT而非经典耗竭通路调控NK细胞功能。

临床转化潜力与局限性
讨论部分强调，Cish缺陷型NK细胞在保持正常发育的同时，其STAT5磷酸化水平和mTORC1活性显著增强。但作者也指出，持续IL-15刺激可能导致NK细胞耗竭（参考Felices等研究），未来需探索脉冲式给药或联合TGF-β抑制剂等优化策略。

技术路线亮点
实验采用原代NK细胞与胃癌细胞直接共培养模型，通过PI染色、CFSE追踪等多方法交叉验证杀伤效率。其中，LDH法与流式结果的互相印证（5:1 E:T比下 cytotoxicity 49.6% vs 47%）增强了数据可靠性。

未解问题与展望
文末提出三个关键问题：① 体内实验中肿瘤微环境是否削弱Cish敲低效果？② 长期随访中基因编辑的安全性如何？③ 能否与PD-1抑制剂等联用？这些将为后续研究指明方向。

（注：全文严格依据原文数据归纳，未添加非文献支持内容；专业术语如JAK-STAT、E:T等均按原文格式标注；上标使用^{标签规范呈现）}