EPM2AIP1免疫组化替代MLH1启动子甲基化检测在子宫内膜癌中的验证研究

这篇研究通过多中心验证证实，EPM2AIP1免疫组化（IHC）可作为MLH1启动子甲基化的可靠替代标志物，用于子宫内膜癌（EC）的错配修复（MMR）状态评估。研究显示两者一致性达96.5%-100%，且IHC具有成本低、周期短的优势，但需注意样本前处理（如活检优于子宫切除标本）和临界值判读。该发现为临床简化Lynch综合征筛查和MMR缺陷（MMRd）检测提供了新策略。

　　

Abstract
子宫内膜癌（EC）中错配修复（MMR）状态对诊断、预后和治疗至关重要。MLH1缺失是MMR缺陷（MMRd）最常见原因，通常由启动子超甲基化引起。本研究验证了EPM2AIP1免疫组化作为MLH1启动子甲基化替代标志物的可行性。

Introduction
约30%的EC存在MMRd和微卫星不稳定性（MSI）。MLH1启动子甲基化是散发性EC的主要机制，现有甲基化检测方法（如焦磷酸测序）复杂且耗时。EPM2AIP1与MLH1共享双向启动子，甲基化会导致两者共沉默，前期研究提示其IHC可能成为替代方案。

Materials and methods
研究纳入两个独立队列：

1. 西班牙Lleida机构：70例MLH1阴性EC（56例低级别内膜样癌）和30例对照，采用4抗体MMR-IHC（MLH1/MSH2/MSH6/PMS2）和EPM2AIP1-IHC（OriGene克隆OTI2A2）。
2. 奥地利Graz机构：29例MLH1阴性EC和30例对照，采用2抗体MMR-IHC（MSH6/PMS2初筛）策略。
   甲基化分析采用焦磷酸测序（cut-off值10%），对临界病例进行肿瘤细胞富集复测。

Results

• Lleida队列：64/70例MLH1甲基化EC均显示EPM2AIP1阴性（100%一致性）。3例临界值病例经微切割后甲基化水平显著升高（13.8%→60%）。
• Graz队列：28/29例甲基化EC中27例EPM2AIP1阴性（96.5%），1例假阳性；对照组中1例MLH1阳性但EPM2AIP1阴性（假阴性）。
• 活检标本中EPM2AIP1染色质量优于子宫切除标本（后者50%出现胞质非特异性染色）。

Discussion
研究证实EPM2AIP1-IHC与甲基化检测高度一致，但存在罕见例外：

1. MLH1甲基化但EPM2AIP1阳性（可能因甲基化异质性）；
2. MLH1未甲基化但EPM2AIP1阴性（或存在其他表观调控）。
   值得注意的是，EPM2AIP1染色质量受前处理影响显著，延迟固定的子宫标本易出现假阴性。与结直肠癌不同（仅64%一致性），EC中EPM2AIP1特异性更优，这可能反映组织特异性表观调控差异。

临床意义
该技术可简化MMRd检测流程，尤其适用于：

• Lynch综合征快速筛查（甲基化可排除遗传性病例）；
• 低肿瘤含量样本（IHC可避免分子检测假阴性）；
• 资源有限机构（替代昂贵分子检测）。
  未来需探索EPM2AIP1表达异常的分子机制，并优化判读标准以降低3-6%的假阴性/阳性率。