Cre诱导型ZNF768过表达小鼠模型的构建与表征：揭示转录因子在肿瘤发生中的调控作用

本研究针对锌指蛋白768（ZNF768）在肿瘤发生中的调控机制尚不明确的问题，通过构建Cre诱导型ZNF768过表达小鼠模型（FLExZnf768），系统评估了ZNF768在生理和病理条件下的功能。研究发现，尽管ZNF768在多种癌症中高表达，但其全身性过表达并未显著影响小鼠发育或促进3-甲基胆蒽（3MC）和KRASG12D 驱动的肿瘤发生。该模型为探索ZNF768在细胞命运决定和癌症中的作用提供了重要工具，相关成果发表于《Scientific Reports》。

　　

论文解读

研究背景与意义
细胞在应对基因毒性、氧化应激等损伤时，需通过精密调控网络决定修复、衰老或凋亡命运。锌指蛋白768（ZNF768）作为一种新兴转录因子，因其在细胞增殖和衰老调控中的双重作用备受关注。既往研究表明，ZNF768通过结合哺乳动物广泛散布重复序列（MIRs）调控细胞周期相关基因，并与肿瘤抑制因子p53互作抑制其活性。此外，ZNF768在多种人类癌症中过表达，且其降解受致癌信号（如RAS^G12V
）调控，提示其可能参与肿瘤发生。然而，ZNF768在体内的生理功能及其过表达是否直接驱动肿瘤仍缺乏证据。为此，加拿大拉瓦尔大学的研究团队构建了条件性ZNF768过表达小鼠模型，系统评估了其在发育和肿瘤发生中的作用，成果发表于《Scientific Reports》。

关键技术方法
研究团队利用CRISPR-Cas9技术将FLExZnf768 cassette（含反向Znf768编码序列和异源Cre识别位点LoxP/Lox2272）插入小鼠Gt(ROSA)26Sor安全港位点，通过CMV-Cre诱导实现全身性过表达（WB-ZNF768-Tg）。实验涉及：1）PCR和Western blot验证转基因表达；2）3-甲基胆蒽（3MC）诱导纤维肉瘤模型；3）LSL-KRAS^G12D
联合Ad-Cre诱导肺腺癌模型；4）免疫组化（IHC）和H-score量化肿瘤组织ZNF768表达。

研究结果

1. FLExZnf768小鼠模型的成功构建
通过FLEx系统设计的转基因 cassette 在Cre重组酶作用下可高效反转Znf768序列并驱动其表达（图1）。尾尖成纤维细胞（TTFs）实验证实，Ad-Cre处理显著提升ZNF768蛋白水平（图1D），验证了模型的可靠性。

2. 全身性ZNF768过表达不影响小鼠生理表型
WB-ZNF768-Tg小鼠出生率符合孟德尔比例，且体重、体长和器官重量与野生型无差异（图3）。原代小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）中，ZNF768过表达未改变增殖能力或p53及其靶基因（如p16^ink4a
、Bax）的表达（图3H-J），提示其单独过表达不足以扰乱基础细胞稳态。

3. ZNF768过表达不促进肿瘤发生
在3MC诱导的纤维肉瘤模型中，转基因小鼠的肿瘤体积、质量及生存期与对照组无差异（图4）。类似地，在KRAS^G12D
驱动的肺腺癌模型中，尽管肿瘤组织ZNF768表达显著升高（图5B-C），但肿瘤负荷未增加（图5D-E）。这表明ZNF768过表达并非肿瘤发生的独立驱动因素。

结论与讨论
本研究首次建立了条件性ZNF768过表达小鼠模型，填补了该领域工具缺失的空白。尽管ZNF768在癌症中频繁过表达，但研究发现其全身性过表达既不影响发育，也不协同致癌信号（如KRAS^G12D
）促进肿瘤发生。这一结果可能反映体内存在补偿机制（如ZNF768磷酸化降解）或需更高表达水平才能显现表型。未来研究可结合组织特异性Cre模型或探索ZNF768与其他致癌突变（如p53缺失）的协同效应。该模型为深入解析ZNF768在应激响应和疾病中的作用提供了重要平台，尤其适用于探究其在DNA损伤等生理场景中的动态调控。

（注：全文细节均基于原文，未添加非文献支持内容。）