siRNA靶向治疗HBV复制模型中的残留病毒表达机制及联合治疗策略研究

【编辑推荐】为解决siRNA单药治疗慢性乙型肝炎（CHB）时疗效持久性不足的问题，研究人员通过siRNA靶向HBV S/X/C编码区，结合免疫荧光（IF）和荧光原位杂交（FISH）技术，在HepG2-NTCP细胞和rAAV8-HBV1.3小鼠模型中揭示了残留病毒核酸的分布特征及抑制瓶颈，发现siRNA与核心抑制剂GLS4联用可进一步降低病毒DNA。该研究为优化HBV功能治愈策略提供了新见解。

　　

慢性乙型肝炎（CHB）是全球公共卫生的重大挑战，约2.57亿人受其困扰。尽管核苷类似物（NAs）和干扰素（IFN）能抑制病毒复制，但难以清除肝细胞内的共价闭合环状DNA（cccDNA），导致患者罕达功能治愈（定义为持续HBsAg清除）。近年来，小干扰RNA（siRNA）因其高效降解HBV RNA的能力成为研究热点，但临床数据显示其单药疗效短暂，停药后易反弹。这一瓶颈促使科学家深入探索siRNA治疗后残留病毒的来源及分布机制。

来自中国的研究团队在《Antiviral Research》发表论文，通过靶向HBV S、X、C编码区的siRNA（siHBV-S/X/C），结合免疫荧光（IF）和荧光原位杂交（FISH）技术，在HBV感染的HepG2-NTCP细胞模型和rAAV8-HBV1.3小鼠模型中，系统分析了单细胞水平的病毒残留规律。研究采用GalNAc（N-乙酰半乳糖胺）偶联siRNA增强肝靶向性，并联合核心抑制剂GLS4评估协同效应。

研究结果

1. siRNA对HBV抗原和核酸的整体抑制效果
   siHBV-S/X/C均能降低病毒标志物水平，但单次给药后HBV阳性细胞比例未显著减少。残留抗原和核酸信号广泛分布于单个细胞中，提示siRNA存在“全或无”效应。

2. 剂量依赖性与靶标差异性
   siRNA抑制效果呈剂量依赖性，但对不同病毒标志物（如HBsAg、HBcAg）的抑制效率差异显著，可能与靶区域可及性或病毒表达模式有关。核心颗粒DNA（core particle DNA）的抑制存在平台效应。

3. 联合治疗增效机制
   siRNA与GLS4联用可进一步降低原代人肝细胞内的病毒DNA，证实靶向不同病毒生命周期的药物具有协同潜力。

讨论与意义
该研究首次通过单细胞原位技术揭示了siRNA治疗后HBV残留的异质性分布，指出其疗效受限于靶标选择性和细胞内病毒复制动态。核心颗粒DNA的抑制瓶颈提示需联合靶向cccDNA或衣壳装配的药物。研究为设计“siRNA+免疫调节剂/核心抑制剂”的联合方案提供了实验依据，推动HBV功能治愈策略的优化。论文通讯作者Zhenghong Yuan和Jieliang Chen强调，未来需在临床样本中验证这些发现，并探索更精准的siRNA递送系统。