重组水泡性口炎病毒模型揭示奶牛H5N1流感病毒糖蛋白进化机制及其应用价值

这篇研究创新性地构建了表达奶牛H5N1高致病性禽流感（HPAI）病毒HA/NA糖蛋白的重组水泡性口炎病毒（rVSV-H5N1dc2024），可在生物安全二级（BSL-2）条件下模拟病毒进化。该模型能高效评估单抗（mAb）逃逸、神经氨酸酶抑制剂（如奥司他韦）耐药突变（如NA-H275Y），为H5N1防控提供安全研究工具，加速疫苗和药物开发。

　　

重组VSV模型构建与特性验证
研究团队利用重组水泡性口炎病毒（rVSV）平台，将奶牛源H5N1病毒（A/dairy cow/Texas/24–008749-001/2024）的血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）基因替换VSV的G蛋白，构建出rVSV-H5N1dc2024。该病毒在BSL-2条件下可复制，滴度达3.1×10⁸
PFU/mL，并携带eGFP荧光标记。电泳和Western blot证实病毒颗粒成功包装HA/NA蛋白，且HA被宿主蛋白酶切割为具有融合活性的HA1/HA2形式。

抗体中和与逃逸研究
rVSV-H5N1dc2024对HA头部靶向单抗（如FLD194、65C6）的中和敏感性与野生型H5N1病毒一致，但对茎部抗体（如CR6261）敏感性增强。通过批量筛选和噬斑分离，团队快速获得HA突变株（Q122R/P、P125H、K165M），这些突变均位于单抗结合表位，证实模型可用于预测抗原逃逸。值得注意的是，人类静脉免疫球蛋白（IVIG）仅微弱抑制病毒扩散，提示人群对H5N1 clade 2.3.4.4b预存免疫力有限。

神经氨酸酶抑制剂耐药性评估
研究在rVSV中引入NA-H275Y突变（源自禽类流行株），发现该突变使病毒对奥司他韦的耐药性提升250倍（IC₅₀
从2 μM升至>500 μM）。这一结果验证了监测中发现的耐药突变功能，且无需操作高致病性活病毒。

应用前景与意义
该模型突破HPAI研究的生物安全限制，可广泛应用于：

1. 单抗/疫苗候选物的快速筛选
2. 耐药突变前瞻性研究（如NA抑制剂、聚合酶抑制剂）
3. 病毒进化路径预测
   其荧光标记特性支持高通量筛选，而rVSV载体本身具备疫苗开发潜力（如埃博拉疫苗Ervebo）。研究为应对H5N1跨种传播威胁提供了安全、灵活的工具平台，显著降低了疫情响应研究的门槛。

方法学亮点
实验采用BSRT7细胞系进行病毒拯救，通过噬斑实验和纳米孔测序监控病毒变异。单抗通过293F细胞瞬时表达纯化，中和实验采用TCID₅₀
和荧光显微成像双读值系统，确保数据可靠性。研究强调，rVSV模型与真实病毒的10倍中和效价差异（尤其对茎部抗体）需在数据分析时校正，但其高效性远超慢病毒假型系统。