RORγt通过调控HB-EGF而非IL-22表达维持肠道稳态的机制研究

本研究揭示转录因子RORγt在激活态3型固有淋巴细胞（ILC3s）中的关键作用机制：通过单细胞测序和IL-22命运示踪（FM）小鼠模型发现，RORγt缺失虽不影响ILC3s维持和IL-22分泌，但显著降低肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）表达，导致DSS诱导结肠炎加重。该发现为RORγt抑制剂临床评估提供了重要依据。

　　

单细胞转录组分析揭示ILC3激活相关转录因子

通过整合多个公共单细胞RNA测序数据集（包括GSE124880、GSE144687等），研究者对ILC3s进行了深度聚类分析。8个亚群被明确划分为自然细胞毒性受体阳性（NCR⁺
）ILC3s、双阴性（DN）ILC3s和淋巴组织诱导细胞（LTi）三大亚群。伪时间轨迹分析显示，各亚群存在明确的激活路径：NCR⁺
亚群从C0经C2、C1最终到达C3状态，DN亚群从C4向C5演进，LTi亚群则从C6向C7发展。值得注意的是，91个共同上调基因中，RORγt位列前5位关键转录因子，提示其在ILC3激活阶段的重要调控作用。

RORγt缺失对激活态ILC3s的亚群特异性影响

研究团队构建了IL-22-FM^ΔRorc
基因工程小鼠（Il22^Cre/+
Rosa26^LSL-Tdtomato
Rorc^fl/fl
），通过命运示踪技术发现：RORγt缺失后，IL-22^fm+
ex-ILC3s中LTi细胞比例显著降低（约减少60%），而NCR⁺
亚群维持相对稳定。流式细胞术证实，约80%的示踪细胞成功敲除RORγt，但仍有20%细胞保留RORγt表达。结肠组织分析显示，IL-22^fm+
ex-ILC3s数量从7×10⁴
降至3.4×10⁴
，而IL-22^fm?
群体数量未受影响。值得注意的是，缺失RORγt的NCR⁺
ex-ILC3s表现出NKp46表达上调，暗示其可能获得部分ILC1样特征。

ex-ILC3s保留核心功能特征

RNA测序分析揭示，NKp46⁺
IL-22^fm+
ex-ILC3s转录组特征更接近野生型ILC3s而非ILC1s。虽然这些细胞高表达NKp46（与ILC1s相当），但仍保持低水平T-bet表达且缺失NK1.1分子。功能实验证实，ex-ILC3s在IL-1β和IL-23刺激下仍能分泌IL-22（产量约为野生型的85%），但干扰素γ（IFNγ）分泌能力极低。这种独特的"混合表型"表明，RORγt缺失虽引发部分可塑性变化，但未根本改变ILC3s的核心身份特征。

肠道稳态维持的分子机制

在稳态条件下，IL-22-FM^ΔRorc
小鼠结肠IL-22水平与对照组相当。上皮细胞增殖指标、紧密连接蛋白（E-cadherin、occludin等）表达以及粘液层厚度均无显著差异。16S rRNA测序显示两组小鼠肠道菌群组成相似，抗菌肽Reg3b/Reg3g表达量相当。在鼠枸橼酸杆菌（C. rodentium）感染模型中，ex-ILC3s仍能提供足够免疫保护：感染第4天，两组小鼠粪便病原体载量（约10⁸
CFU/g）、结肠缩短程度（约6.5cm）和病理评分（3.2分）无统计学差异。这些结果证实，RORγt缺失不影响ILC3s的稳态维持和基础防御功能。

HB-EGF调控在结肠炎中的关键作用

转录组分析发现，RORγt缺失导致ex-ILC3s中HB-EGF表达降低2.3倍，前列腺素E2受体（Ptger2）表达下降1.8倍。在DSS诱导结肠炎模型中，野生型小鼠结肠Hbegf表达上调3.5倍，而突变组无显著变化。病理学评估显示，突变组体重下降更显著（最大差值达15%），结肠长度缩短更明显（4.8cm vs 6.2cm），组织学评分更高（4.5分 vs 2.8分）。重组HB-EGF治疗可完全逆转这些表型。机制研究表明，RORγt通过维持Hbegf基因位点两个特定染色质开放区域（OCR1/OCR2）的可及性来调控其表达，这些区域在ex-ILC3s中可及性降低40%-60%。

研究局限性与临床意义

该研究存在两方面局限：首先，IL-22示踪可能遗漏部分激活态ILC3s亚群；其次，对RORγt调控网络的解析仍需单细胞ATAC-seq等新技术补充。但研究首次阐明RORγt通过"双轨制"调控机制：在发育阶段决定ILC3命运，在激活阶段特异性调控HB-EGF表达。这一发现为RORγt抑制剂（如GSK805、VTP-938）的临床应用提供了重要警示——长期抑制可能影响肠道损伤修复能力，建议治疗中监测HB-EGF水平变化。