基于色谱分馏-q1 H-NMR-手性串联LC-MS/MS联用技术的丹参多组分无标准品定量分析方法开发

【编辑推荐】本研究针对中药质量评价中标准品短缺的瓶颈问题，创新性整合自动色谱分馏、定量1 H-NMR（q1 H-NMR）和手性串联LC-t SRM技术，建立丹参中15种酚酸及二萜醌的无标准品定量新策略。通过自动化分馏获得伪混合标准品，结合q1 H-NMR绝对定量和手性柱分离异构体，实现不同产地丹参成分的精准定量，为复杂基质中药质量评价提供普适性解决方案。

　　

在传统中医药的现代化进程中，质量评价始终是制约其国际认可的关键瓶颈。以丹参（Salvia miltiorrhiza）为例，这种用于治疗心血管疾病的著名中药含有酚酸和二萜醌两大类活性成分，但复杂的化学组成和标准品短缺使得常规LC-MS/MS定量方法难以推广。目前，业界普遍依赖"外标法"进行多组分定量，这不仅需要大量价格昂贵的标准品，还无法解决异构体（如甲基烯丹参醌与1,2-二氢丹参酮I）的分离难题。

针对这一双重挑战，国内某研究团队在《Journal of Chromatography A》发表了一项突破性研究。他们创造性整合了三大技术模块：首先通过自制自动化分馏装置将丹参粗提物分离为16个组分，利用定量¹
H-NMR（q¹
H-NMR）直接测定各组分中15种目标物的绝对含量；随后将含目标物的13个组分混合作为"伪标准品"；最终开发出串联手性-非手性色谱柱与定制化选择反应监测（t
SRM）的LC-MS/MS方法，成功实现丹参中9种酚酸和6种二萜醌（包括难分离异构体）的无标准品定量。

关键技术包括：1）自动化色谱分馏系统实现复杂基质简化；2）q¹
H-NMR以内标法（吡嗪为IS1）直接定量分馏组分；3）串联非手性-手性色谱柱解决异构体共洗脱；4）t
SRM通过调节碰撞能量优化高低丰度成分检测。研究选用5个不同产地的丹参样本进行方法验证。

【Definitive structural identification and quantification of the targeted analytes】
通过半制备LC在274 nm下分馏获得16个组分，其中Fr. VIII因¹
H-NMR信号重叠进一步细分为3个子组分。q¹
H-NMR结合LC-QTOF-MS鉴定出15种目标物，包括Fr. XI中的丹酚酸B和Fr. XV中的丹参酮IIA等，各组分定量结果RSD<3.2%。

【Conclusions】
该研究建立的"分馏-q¹
H-NMR-串联LC-MS/MS"三联技术体系，首次实现中药多组分无标准品定量：1）自动化分馏简化复杂基质；2）q¹
H-NMR突破标准品依赖；3）手性串联色谱解决异构体分离难题。对5个产地丹参的分析显示定量结果与传统方法一致（相对误差<8.9%），但节省90%以上标准品成本。

这项研究的意义在于：1）为中药质量评价提供通用技术框架；2）手性分离策略可推广至其他含异构体药物分析；3）q¹
H-NMR与LC-MS/MS的联用模式为复杂基质定量开辟新途径。正如通讯作者Yunfang Zhao和Yuelin Song强调的，该方法特别适用于标准品稀缺但需多组分监控的研究场景，包括中药质量控制、天然药物代谢研究等领域。