印度查谟和克什米尔地区水稻花青素的HPTLC定量分析方法开发与验证及其在食品营养质量控制中的应用

本研究针对克什米尔地区特色水稻品种中花青素（anthocyanins）的定量分析难题，开发了基于高效薄层色谱（HPTLC）的标准化方法，成功鉴定出包括花翠素-3-葡萄糖苷氯化物（cyanidin-3-glucoside chloride）在内的5种关键成分，验证了方法的特异性（r2>0.999）、精密度（RSD<2%）和灵敏度（LOD 7.57-36.08 ng/band），为特色稻米的质量控制与防伪提供了可靠技术支撑。

　　

在喜马拉雅山脉的克什米尔河谷，生长着一种独特的温带水稻——这些被称为"黑米"和"Mushk Budji"的古老品种不仅承载着当地文化记忆（传统用于孕妇营养补充和庆典仪式），更因其富含的花青素（anthocyanins）而具有显著的抗氧化、抗炎等健康功效。然而，这些珍贵的地方品种正面临两大挑战：一方面，缺乏快速准确的质量控制方法导致市场易受掺假问题困扰；另一方面，此前对克什米尔水稻营养价值的系统研究仅局限于LC-MS等复杂技术，难以在基层推广。

针对这一现状，查谟-克什米尔农业大学的研究团队在生物技术部（DBT）资助下，首次将高效薄层色谱（High Performance Thin Layer Chromatography, HPTLC）技术应用于该地区水稻花青素分析。这项发表于《Journal of Chromatography A》的研究，通过优化硅胶60F₂₅₄
薄层板和特定流动相（乙酸乙酯:2-丁醇:甲酸:水=9:6:3:3），在520-540 nm波长下实现了5种花青素的高通量检测。

关键技术方法包括：从150个水稻基因型（含地方品种和芳香品种）中筛选样本；采用HPTLC指纹图谱分析结合密度扫描；参照ICH Q2(R2)指南进行方法学验证；通过与HPLC/LC-MS对比评估技术优势。

【结果】

1. 样品收集与化学分析：视觉评估筛选出的黑米和Mushk Budji中，检测到花葵素-3-葡萄糖苷氯化物（peonidin-3-O-glucoside chloride）等标志性成分，其中花青素-3,5-二葡萄糖苷氯化物（cyanidin-3,5-diglucoside chloride）为黑米特有。

2. 方法验证：建立的HPTLC方法显示优异线性（r2 0.9992-0.9999），日内/日间精密度RSD均<2%，LOD和LOQ分别达7.57 ng/band和12.96 ng/band级别，显著优于传统TLC方法。

3. 技术优势：单板可同时分析20个样本+标准品，溶剂消耗仅为HPLC的1/10，且无需复杂前处理，特别适合粗提物分析。

【讨论与结论】
该研究不仅填补了温带水稻HPTLC分析的技术空白，更揭示了克什米尔地方品种的特殊营养价值——如Mushk Budji中高含量的kuromanin（花翠素-3-葡萄糖苷）与其传统药用用途相印证。相比需要昂贵设备的LC-MS，这种"看得见"的色谱技术（显色斑点在日光下即可观察）为偏远地区农产品质量控制提供了可行方案。作者Pardeep K. Bhardwaj团队特别指出，该方法对保护地方品种知识产权、打击掺假行为具有双重价值，其建立的色谱指纹库可作为"地理标志"认证的科学依据。未来通过将该技术与图像分析算法结合，有望开发出便携式检测设备，让喜马拉雅山区的稻农也能自主监控产品质量。