聚乙二醇沉淀与超速离心联用提升低载量乙肝病毒DNA检测灵敏度的比较研究

为解决低载量乙肝病毒(HBV) DNA检测灵敏度不足的临床难题，研究人员系统比较了聚乙二醇(PEG)沉淀与超速离心两种前处理技术。研究发现，PEG沉淀法通过20 mL大体积血浆处理可检出全部23例低载量样本，其灵敏度与超速离心相当，且成本更低、操作更简便，为输血安全和隐匿性乙肝诊断提供了经济高效的解决方案。

　　

在病毒性肝炎防控领域，乙肝病毒(HBV)感染仍是全球重大公共卫生挑战，全球约2.57亿慢性感染者中，隐匿性乙肝感染(OBI)因病毒载量(VL)极低且波动大，成为输血安全和临床诊断的难点。现有核酸检测(NAT)技术对低载量样本(3-7115 IU/mL)的检出率有限，而超速离心虽能提高灵敏度，却因设备昂贵、操作复杂难以普及。这一困境促使研究者探索更实用的病毒浓缩方案。

英国国家卫生与保健研究所(NIHR)支持的研究团队在《Journal of Clinical Virology》发表论文，创新性地系统评估了聚乙二醇(PEG)沉淀法在大体积血浆处理中的表现。研究采用五种方法对比：标准体积(0.2 mL/5 mL)直接提取、PEG沉淀(10 mL/20 mL)和超速离心(35 mL)，通过实时定量PCR(qPCR)、Sanger测序和靶向Illumina测序等多维度验证。关键技术包括：大体积血浆PEG沉淀优化、超速离心参数标准化、跨方法病毒载量定量比较，以及基于23例低载量临床样本的NGS基因组覆盖分析。

3.1 可行性实验
通过稀释内参验证发现，PEG法处理20 mL血浆时Ct值稳定(28.44±0.03)，虽较标准方法(27.15±0.05)略有信号损失，但换算后病毒回收率仍达理论值的36.3%，证实大体积处理的可行性。

3.2 病毒载量比较
PEG法(20 mL)检出率达100%(23/23)，显著优于标准5 mL提取法(22/23)，且中位VL提升至1360 IU/mL。超速离心组(35 mL)因样本限制仅测试12例，但检出率(11/12)与PEG相当(p=0.067)。

3.3 HBV基因组测序
PEG-20 mL法使Sanger测序成功率从标准法的78%(18/23)提升至100%，且覆盖度增加。NGS分析显示，PEG处理样本的HBV去重读长数提升10倍，同时检出人类疱疹病毒(HHV-8)和指环病毒(Anellovirus)等共感染病原体。

3.5 成本效益分析
PEG法单样本成本仅15英镑，远低于超速离心(需9万英镑设备投入)，且批次处理量达10例/次，更适合临床推广。

该研究首次证实PEG沉淀法通过20 mL血浆处理可实现与超速离心相当的检测灵敏度，且具有三大突破性意义：①为血站筛查OBI提供经济高效的方案，单例检测成本降低80%；②大体积处理显著提升NGS病毒基因组覆盖度，助力低载量样本的分子流行病学研究；③建立的标准化流程可扩展至HIV、SARS-CoV-2等其他病毒检测领域。作者特别指出，PEG沉淀中 pellet 重悬技术仍需优化，未来可探索其与微流控等技术的联用，进一步提升超敏检测的临床适用性。