精液血浆对冷冻解冻驴精液人工授精后母驴子宫中性粒细胞动态及生育力的调控作用

本研究针对冷冻解冻驴精液人工授精(FTS)导致母驴子宫炎症反应强烈、受孕率低的问题，探讨了精液血浆(SP)对以甲酰胺类为冷冻保护剂的驴精液授精后子宫内膜炎症时序的影响。通过对比新鲜精液(FS)、冷冻精液(FTS)及冷冻精液+SP(FTS-SP)三组母驴的子宫细胞学变化，发现SP虽未减轻早期炎症，但显著加速了24-48小时后的中性粒细胞(PMN)清除速率，且妊娠母驴的PMN清除率显著高于未妊娠个体。该研究为改善驴冷冻精液繁殖效率提供了关键理论依据，发表于《Journal of Equine Veterinary Science》。

　　

在驴繁殖领域，冷冻精液人工授精技术长期面临一个棘手难题：尽管冷冻解冻后的驴精子在母马体内能取得较好受孕率，但在同种母驴中却普遍引发强烈子宫炎症反应，导致受孕率骤降。这一现象暗示问题可能不在于精子本身，而在于母驴子宫对冷冻保护剂或精液成分的特异性反应。既往研究多聚焦甘油基冷冻保护剂的影响，而甲酰胺类替代方案及精液血浆(SP)的调控作用尚不明确，这正是墨西哥国立自治大学团队开展本研究的出发点。

研究人员设计了三组对照实验：新鲜精液(FS)组、冷冻解冻精液(FTS)组和冷冻精液+SP(FTS-SP)组，采用含2.5% N-甲基甲酰胺(MF)和2.5%二甲基甲酰胺(DMF)的无甘油冷冻保护剂。通过子宫细胞刷在授精后8/24/48小时采集样本，Diff-Quick和巴氏染色双盲计数中性粒细胞(PMN)比例(%PMN)，并结合妊娠诊断分析炎症动态与生育力的关联。

3.1 中性粒细胞动态
数据显示：FTS组在8小时%PMN高达90.7±4.6，显著高于FS组(68.9±4.3)，而FTS-SP组(82.7±4.5)介于二者之间。至24小时，FTS-SP组%PMN反升至84.8±4.5，显著高于其他两组。但随后该组表现出最快的清除速率，48小时时各组差异消失。值得注意的是，所有组48小时%PMN均>50%，但妊娠个体此时%PMN(44.4±3.8)显著低于未妊娠者(64.8±3.6)。

3.2 受孕率
FS组受孕率高达93%，显著优于FTS组(8%)和FTS-SP组(31%)。尽管SP未显著提升FTS-SP组受孕率，但结合既往研究数据汇总分析显示，添加SP可使总体受孕率从17%提升至51%。

3.3 妊娠与未妊娠母驴的PMN差异
关键发现在于：妊娠母驴在24-48小时期间的PMN清除速率显著更快。FTS-SP组中，妊娠个体此阶段%PMN下降46个百分点，而未妊娠者仅降13个百分点，导致48小时时两组出现38个百分点的显著差距。

讨论部分揭示了SP的双相作用机制：虽然不抑制早期炎症，但通过加速后期PMN清除为胚胎着床创造有利环境。这与马科动物独特的"中性粒细胞诱捕网"(NETosis)机制相呼应——SP可能通过调控NETosis选择性保护活精子，同时加速死亡细胞清除。研究首次证实甲酰胺类冷冻保护剂同样会引发母驴强烈子宫反应，而SP的时序性调控作用为优化冷冻精液方案提供了新思路。

该研究的创新性在于：首次系统描绘无甘油冷冻方案下SP对炎症动态的时序影响，提出"清除速率而非绝对炎症强度决定生育力"的新观点，为开发针对性的子宫免疫调节策略奠定了理论基础。未来研究可进一步解析SP中特定蛋白组分与NETosis的分子互作机制。