基于血清药物化学与网络药理学的机制探索：大黄?虫丸通过caspase-3/Bcl-2/Bax通路诱导肝星状细胞凋亡抗肝纤维化的多组学验证

本研究针对肝纤维化(HF)治疗缺乏标准化方案的临床难题，通过整合血清药物化学、UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS、网络药理学和分子对接技术，系统揭示了大黄?虫丸(DHZCP)中41种入血成分（包括新活性原型negletein）通过caspase-3/Bcl-2/Bax通路诱导肝星状细胞(HSC)凋亡的抗HF机制，为中药复方质量标准化提供了新范式。

　　

肝纤维化(HF)作为慢性肝病发展的关键病理阶段，全球每年导致数百万人进展至肝硬化甚至肝癌。尽管现代医学在病因治疗上取得进展，但针对HF本身仍缺乏标准化治疗方案。传统中药大黄?虫丸(DHZCP)源自《金匮要略》，临床显示抗HF疗效显著，但其药效物质基础与作用机制如同"黑箱"——已知能抑制肝星状细胞(HSC)活化、改善肝窦毛细血管化，但具体哪些成分起效、如何调控分子网络仍是未解之谜。这种认知空白严重阻碍了中药复方的质量标准化与国际认可。

为破解这一难题，来自广州中医药大学的研究团队创新性地采用"化学组学-生物网络-活体验证"三级研究策略。通过UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS（超高效液相色谱-电喷雾-四极杆飞行时间质谱联用技术）鉴定出DHZCP中496种化学成分，结合血清药物化学分析发现41种入血成分（包括18种代谢物和23种原型），其中黄酮类化合物negletein(NE)被首次确认为新型活性原型。网络药理学预测显示这些成分可能通过凋亡通路作用于HF，分子 docking（分子对接）验证了NE与caspase-3等靶点的强结合能力。后续斑马鱼和小鼠实验证实，DHZCP含药血清及NE可通过上调caspase-3/Bcl-2/Bax通路诱导活化态HSC凋亡，显著改善CCl₄
和TAA（硫代乙酰胺）诱导的纤维化。该研究发表于《Journal of Ethnopharmacology》，为中药复方研究提供了"成分溯源-机制预测-实验验证"的完整方法论范式。

关键技术包括：1) UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS进行复杂体系成分解析；2) 大鼠血清药物化学分析追踪入血成分；3) 网络药理学构建"成分-靶点-通路"多维网络；4) 分子对接验证活性成分与关键靶点相互作用；5) 斑马鱼胚胎模型进行体内药效评价；6) HSC-T6细胞系用于体外机制研究。

【主要结果】

1. Outstanding in vivo anti-HF efficacy of DHZCP
   斑马鱼实验显示DHZCP在50μg/mL以下剂量安全，能剂量依赖性降低TAA诱导的纤维化标志物COL1A1表达；小鼠模型证实DHZCP可显著改善CCl₄
   导致的肝组织胶原沉积。

2. Identification of chemical constituents and serum components
   UHPLC-ESI-QTOF-MS/MS鉴定出496种成分，包括蒽醌类（如大黄素）、黄酮类（如黄芩苷）等；血清分析发现41种血中移行成分，其中NE经甲基化代谢后生物利用度显著提高。

3. Network pharmacology and molecular docking
   构建的"DHZCP-HF"网络包含218个交集靶点，KEGG富集显示凋亡通路显著激活；NE与caspase-3的结合能达-7.8 kcal/mol，优于阳性对照STS（星形孢菌素）。

4. Experimental validation of anti-fibrotic mechanism
   DHZCP含药血清使活化态HSC-T6细胞的凋亡率提升3.2倍，伴随caspase-3活性增强2.4倍；Western blot显示Bax/Bcl-2比值上升5.1倍，证实凋亡通路激活。

【结论与意义】
该研究首次系统阐明DHZCP通过"多成分-多靶点"协同作用抗HF的机制：1) 确立NE为关键活性成分，拓展了黄酮类化合物的药理认知；2) 揭示caspase-3/Bcl-2/Bax通路是中药诱导HSC凋亡的核心机制；3) 创建的"血清药物化学-网络预测-模式生物验证"研究框架，为复杂中药体系的作用机制解析树立了新标杆。临床转化方面，研究不仅为DHZCP的质量标准制定提供了化学成分库（含8类特征性成分指纹图谱），更通过斑马鱼模型建立了中药肝毒性早期预警系统。方法论上，将传统中药理论与现代组学技术深度融合，对推动中医药国际化具有示范意义。