牛蛙养殖中沙门氏菌分离株的分子特征与耐药性分析：基于PFGE和MLST技术的溯源研究

本研究针对牛蛙养殖链中沙门氏菌污染源不明、耐药性扩散等食品安全问题，通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)、多位点序列分型(MLST)和药敏试验，首次在巴西米纳斯吉拉斯州牛蛙生产系统中鉴定出S. Newport(ST614)、S. Infantis(ST32)和S. 6,8:i:-(ST6855)三种高风险血清型，发现环丙沙星(38%)、新霉素(25%)和阿奇霉素(12.5%)耐药株，为防控人畜共患病传播提供了分子流行病学依据。

　　

在全球两栖动物养殖业快速发展的背景下，牛蛙(Lithobates catesbeianus)作为重要的经济物种，其养殖过程中的微生物污染问题日益凸显。静止水体养殖模式虽然成本低廉，却成为沙门氏菌(Salmonella)等病原体的理想温床。这种"水产-陆生"跨界传播特性使得牛蛙成为人畜共患病的重要媒介——中国市场的蛙类样本中沙门氏菌检出率高达65%，巴西屠宰场的阳性率也达到13.6%。更令人担忧的是，沙门氏菌的耐药性问题日趋严重，中国研究发现近70%的蛙源分离株对至少一种抗生素产生耐药性。面对这一严峻形势，巴西米纳斯吉拉斯州的研究团队开展了一项开创性研究，成果发表在《Journal of Food Protection》上。

研究人员采用脉冲场凝胶电泳(PFGE，通过XbaI酶切和电场交替分离DNA大片段)、多位点序列分型(MLST，分析7个管家基因序列)和纸片扩散法药敏试验，对来自140份牛蛙胴体冲洗液和养殖池水的8株沙门氏菌(含6株胴体源和2株水体源)进行了系统分析。样本源自2017-2018年巴西乌贝兰迪亚某封闭式养殖场的监测数据。

血清型与分子特征
PFGE指纹图谱揭示出4种独特带型：S. Newport胴体分离株与水体分离株呈现明显差异，而所有S. Infantis菌株相似度接近100%，暗示后者可能存在克隆传播。MLST鉴定出3种序列型：ST32(S. Infantis)、ST614(S. Newport)和ST6855(S. 6,8:i:-)，其中ST614同时在胴体和水体中被检出，提示环境-动物交叉污染链。值得注意的是，ST6855是首次在EnteroBase数据库中记录的罕见型别。

耐药性特征
药敏试验显示：3株(38%)耐环丙沙星(CIP)，2株(25%)耐新霉素(NEO)，1株(12.5%)耐阿奇霉素(AZI)——后者尤为关键，因为阿奇霉素是治疗人类沙门氏菌感染的一线药物。所有菌株对头孢类(如头孢噻肟CTX)、碳青霉烯类(美罗培南MER)等7种抗生素保持敏感。与巴西禽肉(73.8% CIP耐药)和猪肉(95% AZI耐药)分离株相比，牛蛙源菌株耐药谱较窄，这可能与蛙类养殖中抗生素使用较少有关。

公共卫生启示
研究发现的ST32和ST614均具有重要流行病学意义：ST32型S. Infantis占欧洲人类感染的2%，而ST614型S. Newport被证实可在牲畜中形成耐多药克隆。特别值得关注的是，4株S. Newport分离自屠宰线不同环节且采集日期不同，暗示该菌株可能在养殖系统内持续循环。

这项研究首次系统描绘了巴西牛蛙养殖链中沙门氏菌的分子流行病学图谱，其创新价值体现在三方面：首先，PFGE与MLST的联合应用揭示了环境-产品传播路径；其次，发现阿奇霉素耐药株为南美地区首次报道；最后，鉴定出新型ST6855序列型扩展了沙门氏菌的基因数据库。研究者建议将分子分型技术纳入常规监测体系，并特别强调需要加强养殖用水的卫生管理。未来研究可通过全基因组测序(WGS)进一步解析毒力基因和耐药基因的传播机制，为制定"从养殖场到餐桌"的精准防控策略提供科学依据。