基于酶解-UHPLC-MS/MS技术的驴皮胶中骆驼皮胶掺假检测方法建立与应用

为解决驴皮胶(DHG)市场掺假问题，研究人员开发了基于酶解-UHPLC-MS/MS的骆驼皮胶(CHG)特异性肽段检测方法，鉴定出CPA与CPB两种标志肽，灵敏度达μg/kg级，在157份市售样品中检出4.5%掺假率，为DHG质量监管提供了新工具。

　　

驴皮胶（Donkey Hide Gelatin, DHG）作为传统中药和保健食品的重要原料，其商业价值近年来持续攀升。然而，高昂的价格催生了以骆驼皮胶（Camel Hide Gelatin, CHG）等廉价替代品掺假的乱象，这不仅涉及商业欺诈，更可能引发宗教禁忌和健康风险。目前DHG质量标准虽已建立对牛、马、猪源成分的检测方案，但对新兴的骆驼源掺假仍缺乏有效监管手段。

为解决这一技术空白，中国食品药品检定研究院等机构的研究人员创新性地将酶解技术与超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）联用，开发出高灵敏度的CHG特异性检测方法。该研究通过蛋白质组学分析锁定骆驼胶原蛋白特有的两个肽段标志物CPA（C₅₁
H₈₄
N₁₈
O₁₆
）和CPB（C₅₁
H₈₄
N₁₈
O₁₇
），经多反应监测（MRM）模式验证，其检测限分别达5μg/kg和3μg/kg，较现有技术提升1-2个数量级。论文发表于《Journal of Food Protection》，为全球食品欺诈防控提供了新范式。

关键技术方法包括：1）采用胰蛋白酶酶解处理157份市售DHG样本；2）优化Acquity UPLC?HSS T3色谱柱的0.1%甲酸-乙腈梯度洗脱条件；3）建立Agilent 6490三重四极杆质谱的ESI+离子化参数；4）通过空白基质加标实验验证方法准确性（回收率86.3-108.9%）。

【材料与方法】
研究团队首先通过纳米液相色谱-轨道阱高分辨质谱（nanoLC-Orbitrap MS/MS）从骆驼胶原蛋白中筛选出CPA和CPB作为特异性标志肽。采用JetStream电喷雾离子源（ESI）在正离子模式下，优化碰撞能量（CPA:19eV，CPB:17eV），选定m/z 402.7→416.3和407.8→416.3作为定量离子对。

【结果与讨论】
特异性验证显示CPA/CPB仅在6种CHG样本中检出，而驴、猪、牛等常见掺假源均无交叉反应。线性范围10-1000μg/L内相关系数r>0.9990，日内精密度RSD<7.7%。在模拟样本测试中，CPA/CPB总量测定结果4.57-5.89mg/g与实际添加量高度吻合。

市场筛查发现4.5%的DHG样本含有骆驼源成分（最高达4.51mg/g），证实骆驼皮胶已成为继马、猪皮胶后的新型掺假物质。该方法突破传统DNA检测在高温加工样品中的局限性，首次实现胶原蛋白水解产物的物种溯源，为修订《中国药典》DHG检测标准提供关键技术支撑。

该研究不仅填补了骆驼源掺假检测的技术空白，其建立的"酶解-色谱分离-标志肽检测"技术路线，可拓展应用于其他胶原蛋白类产品的真伪鉴别。研究者建议将该方法纳入DHG补充检验规程，通过多中心验证进一步推广，这对保障传统中药质量安全、维护消费者权益具有重要实践意义。