基于ACE2-RBD结合抑制的多重中和抗体检测技术：评估SARS-CoV-2变异株免疫逃逸与突破性感染防护的新工具

为解决SARS-CoV-2变异株免疫逃逸导致的疫苗和抗体疗法失效问题，法国研究团队开发了一种基于ACE2-RBD结合抑制的多重替代病毒中和试验（sVNT）。该技术通过高通量检测抗RBD中和抗体水平，证实其与金标准活病毒中和试验的一致性，并应用于人群队列研究，揭示混合免疫（疫苗接种+感染）对Omicron BA.1/BA.2的防护作用，为变异株监测和疫苗策略优化提供高效工具。

　　

SARS-CoV-2疫情持续肆虐，病毒通过高频突变不断产生新的关切变异株（VOCs），如Alpha、Delta和Omicron等。这些变异株的受体结合域（RBD）作为中和抗体的主要靶标，其突变可能导致免疫逃逸，使现有疫苗和抗体疗法效果大打折扣。传统活病毒中和试验虽为金标准，但存在耗时长、需生物安全三级实验室（BSL-3）等瓶颈。如何快速评估人群对变异株的免疫保护水平，成为全球防疫的迫切需求。

法国Institut Pasteur的研究团队在《Journal of Immunological Methods》发表论文，开发了一种基于微球的多重替代病毒中和试验（Multiplex sVNT）。该技术通过检测血清抗体抑制ACE2-RBD结合的能力，实现了对多种变异株中和抗体的同步定量。研究利用法国COVID-Oise队列（n=900）的血清样本，结合剂量反应曲线和临界值分析，验证了该方法与活病毒中和试验的高度一致性，并首次系统评估了混合免疫对Omicron BA.1/BA.2的防护效果。

关键技术包括：1）基于Luminex平台的微球偶联技术，将不同变异株RBD蛋白与荧光编码微球结合；2）ACE2-RBD结合抑制实验模拟病毒入侵过程；3）高通量血清学分析（含预疫情阴性对照、感染恢复期和疫苗接种者样本）；4）使用法国COVID-Oise纵向队列（2020-2022年）验证临床相关性。

研究结果
纵向队列验证：COVID-Oise队列涵盖5-101岁人群，通过定期血清采集建立免疫动力学数据库。研究发现接种2剂疫苗后抗RBD抗体水平较自然感染提高3倍，但针对Omicron的中和活性显著降低。

免疫多样性分析：五类血清样本（阴性对照、早期感染者、单/双剂疫苗接种者、感染+接种者）显示，混合免疫样本对Omicron的50%抑制浓度（IC₅₀
）较单纯接种组提高10倍，证实混合免疫产生更广谱的中和活性。

讨论与结论
该研究突破传统中和试验的局限性，首次实现单次检测评估多种变异株的中和抗体谱。数据表明：1）抗RBD抗体占中和活性的90%，其水平与突破性感染风险负相关；2）混合免疫诱导的交叉反应抗体对Omicron亚系具有显著防护优势；3）多重sVNT与活病毒中和试验的符合率达92%，且通量提升20倍。

这项技术为变异株流行趋势预测、疫苗加强针策略制定提供了高效评估工具。研究者特别指出，该方法可灵活扩展至新发变异株，未来或成为大流行病防控的标准化监测手段。论文通讯作者Olivier Schwartz强调，该成果不仅适用于SARS-CoV-2，其技术框架还可迁移至其他冠状病毒乃至包膜病毒研究领域。