基于链霉亲和素-蛋白G-生物素微球（qBeads）的定量流式细胞术创新研究

针对当前定量流式细胞术（qFCM）中化学偶联微球批次差异大、结合效率低的问题，研究人员开发了基于链霉亲和素-生物素系统（Kd <10?15 M）的定量微球（qBeads）。该技术通过直接/间接法实现CD19、CD20等分子的绝对定量（ABC/MESF），显著提升检测精度，为血液肿瘤、HIV监测等临床应用提供标准化工具。

　　

研究背景与意义
流式细胞术（Flow Cytometry）是单细胞分析的黄金标准，但传统方法仅能提供定性或半定量数据。定量流式细胞术（qFCM）通过校准微球实现分子绝对定量（如抗体结合能力ABC），在HIV患者CD4计数、白血病微小残留病（MRD）监测中具有不可替代的价值。然而，现有Quantibrite?等商业试剂依赖化学偶联，存在批次差异大、结合位点计算复杂（每个抗体双价结合导致高估）等缺陷。

杭州华安单抗生物技术有限公司联合ASDRP团队提出革命性解决方案：利用链霉亲和素-生物素（K_d
<10^?15
M）近乎100%的结合效率，开发定量链霉亲和素-蛋白G-生物素微球（qBeads）。这一发表于《Journal of Immunological Methods》的研究，为生物医学研究提供了更精准的分子标尺。

关键技术方法
研究采用6.6 μm链霉亲和素微球（Spherotech SVP-60-5）作为载体，梯度偶联生物素-FITC验证荧光强度线性关系；通过蛋白G桥接实现抗体定向固定；使用CD19-APC、CD20-FITC等抗体验证直接/间接检测法；对比传统化学偶联微球评估批次稳定性。

研究结果

1. 试剂与细胞系
   验证了qBeads与B细胞系（CD19/CD20阳性）及uPar（尿激酶受体）抗体的兼容性，确保系统普适性。

2. 链霉亲和素-生物素微球的qFCM验证
   荧光强度与生物素-FITC剂量呈线性相关（R²

0.99），UV成像显示梯度荧光差异，证实结合效率可控。

1. 讨论
   qBeads相较传统技术三大优势：

• 避免化学偶联的批次变异
• 蛋白G定向固定提升抗体结合均一性
• 单结合位点设计（1:1生物素-链霉亲和素）消除多价结合误差

1. 结论
   qBeads成功实现CD19/CD20的ABC定量，为MRD检测、免疫治疗监测提供标准化平台。其模块化设计可扩展至其他标志物检测，推动qFCM从科研向临床转化。

研究启示
该技术突破传统qFCM的“黑箱”困境，通过生物正交化学实现纳米级精确定量。Maitreyi Bharath等作者特别指出，在白血病CD19动态监测中，qBeads可将检测灵敏度提升10倍。未来或将成为液体活检、CAR-T疗效评估的新基准。