登革病毒包膜蛋白域III IgG抗体ELISA检测方法的开发与验证及其在血清流行病学调查中的应用

【编辑推荐】为应对登革病毒（DENV）诊断技术复杂、成本高的挑战，阿根廷研究人员开发了一种基于四价DENV E蛋白的间接ELISA法，用于检测抗DENV IgG抗体。该技术灵敏度达91.30%、特异性90.91%，ROC曲线下面积（AUC=0.9901），适用于资源有限地区，为血清流行病学调查提供高效工具。

　　

登革病毒（DENV）是全球增长最快的蚊媒传染病之一，每年导致近4亿人感染，其中960万出现临床症状。随着气候变暖和蚊媒栖息地扩张，阿根廷等地区近年病例激增，2023/2024年度病例数突破51万。然而，现有诊断技术如病毒分离或RT-PCR（逆转录聚合酶链反应）依赖昂贵设备，而快速检测试剂的交叉反应性问题突出。更棘手的是，阿根廷等地的血清抗体流行率数据匮乏，严重阻碍疫苗政策的制定。面对这一公共卫生危机，阿根廷国家科学技术研究委员会（CONICET）与布宜诺斯艾利斯大学的研究团队开发了一种创新解决方案——基于昆虫幼虫表达系统的四价DENV包膜蛋白（E蛋白）域III（EDIII）的IgG抗体ELISA检测技术。

研究团队采用Bac to Bac^?
杆状病毒表达系统，在昆虫幼虫中高效表达包含DENV-1至DENV-4四种血清型的重组E蛋白，通过IMAC（固定化金属离子亲和层析）纯化后作为检测抗原。该方法突破传统哺乳动物表达系统的局限，产量高、周期短，且能灵活应对新血清型的出现。为验证性能，研究人员使用22例阴性对照和23例确诊患者血清进行测试，确立2 SDs（标准差分数）为临界值。特别值得注意的是，该方法在504例献血者样本中检出6.55%的阳性率，为阿根廷首次提供大规模血清流行数据。

在《Journal of Immunological Methods》发表的这项研究中，关键实验技术包括：1）昆虫幼虫生物工厂生产重组四价DENV抗原；2）间接ELISA法优化；3）ROC曲线分析确定诊断阈值；4）跨区域血清样本（n=504）的流行病学调查。

【Results主要发现】

1. 抗原生产：SDS-PAGE和Western blot证实成功表达分子量约50 kDa的重组E蛋白，每克幼虫组织产量达2.5 mg。
2. 检测性能：与商业试剂盒（DiaPro）相比，新ELISA的灵敏度提升12%（91.30% vs 79.31%），特异性达90.91%，且与寨卡病毒抗体无交叉反应。
3. 诊断阈值：ROC分析显示AUC=0.9901（95%CI:0.9734-1.000），最佳cut-off值为2 SDs，对应OD₄₅₀
   值0.423。
4. 血清调查：东北部地区阳性率最高（11.2%），显著高于中部地区（4.3%），提示传播风险的地理差异。

【Conclusions与讨论】
该研究开创性地将昆虫幼虫表达系统应用于DENV诊断领域，相比传统方法具有三大优势：1）成本降低60%，适合基层实验室；2）检测窗口期覆盖感染后5天至数年；3）四价抗原设计可识别所有流行血清型。作者Diego Martín Flichman等特别指出，该方法在2023年阿根廷大流行期间完成验证，其高稳定性（CV_内
=2.79%，CV_间
=9.34%）使其成为疫情监测的理想工具。

值得注意的是，研究同时揭示阿根廷的DENV血清流行率（6.55%）远低于巴西（76%）等邻国，这一发现为区域差异化防控策略提供依据。Maria Victoria Miranda在讨论中强调，该技术未来可整合到发热病例鉴别诊断系统中，与寨卡、基孔肯雅热检测形成联合检测方案。研究获得CONICET PIP 11220200102551CO等基金支持，相关专利已由Trebe Biotech实现商业化转化。