舌拭子分子诊断技术在成人肺结核及耐药性检测中的前瞻性多中心诊断准确性研究

为解决肺结核诊断中侵入性采样（如痰液）的局限性，研究人员开展了一项前瞻性多中心研究，评估舌拭子PCR检测对肺结核（TB）及耐药性的诊断性能。结果显示，舌拭子检测与Xpert MTB/RIF的符合率达95.1%，对微生物参考标准（MRS）的敏感性和特异性分别为88.6%和98.3%，且靶向二代测序（tNGS）可有效识别耐药突变。该研究为非侵入性TB诊断提供了高精度方案，尤其适用于痰液采集困难人群，对优化全球结核防控策略具有重要意义。

　　

结核病（Tuberculosis, TB）仍是全球公共卫生的重大威胁，每年导致数百万人感染和死亡。尽管分子诊断技术如Xpert MTB/RIF已显著提升TB检测效率，但其依赖痰液样本的局限性阻碍了在儿童、老年人及痰液分泌不足患者中的应用。此外，耐药性TB的快速检测需求迫切，而传统方法耗时且技术要求高。为此，北京胸科医院等国内多家机构联合开展了一项前瞻性多中心研究，探索舌拭子这一非侵入性样本在TB及耐药性诊断中的潜力，成果发表于《Journal of Infection》。

研究团队采用PCR技术靶向MTB特异性序列（IS6110和IS1081），结合靶向二代测序（tNGS）分析耐药突变。样本来自中国五家结核病专科医院的720名疑似TB成人患者，同步采集舌拭子与痰液进行对比。关键方法包括：舌拭子双拭子采集优化、机械裂解增强DNA提取、qPCR定量检测，以及基于纳米孔测序（GridION平台）的tNGS耐药分析。

研究结果
患者 demographics
720名参与者中，51%经微生物参考标准（MRS）确诊为TB。咳嗽（83.2%）和发热（33.2%）为常见症状，老年（≥60岁）占比50.4%，凸显舌拭子对高龄患者的适用性。

诊断准确性
舌拭子PCR与Xpert MTB/RIF的灵敏度达93.3%，特异性96.8%；与MRS对比时，灵敏度88.6%，特异性98.3%。ROC曲线下面积（AUC）为0.95，证实其高诊断效能。

Xpert半定量分级一致性
高/中细菌负荷样本的符合率为100%，低负荷样本降至85.7%，极低负荷仅67.7%，提示舌拭子对高载菌量病例更可靠。

耐药突变检测
tNGS在Ct值<30时耐药突变检出率达95.89%，但Ct 34-35时骤降至31.25%。常见耐药突变涉及利福平（RIF, 3.75%）、莫西沙星（MFX, 3.75%）和异烟肼（INH, 2.92%）。

讨论与意义
该研究首次系统验证舌拭子分子诊断在TB及耐药性检测中的临床价值。其高灵敏度与特异性为痰液采集困难患者提供了替代方案，尤其适用于老年及资源有限地区。tNGS与Ct值的关联性为耐药检测阈值（Ct<34）提供了实践依据。尽管存在地域间灵敏度差异（78.4%-94.5%），可能与采样质量或细菌负荷有关，但优化后的流程显著提升了检测稳定性。未来需在无症状人群及儿童中进一步验证，并开发床旁检测技术以扩大应用场景。

研究结论强调，舌拭子PCR联合tNGS可整合至现有TB防控体系，提升诊断覆盖率、耐药监测效率及传播阻断能力，为终结TB战略目标提供关键技术支撑。