淡水螺类壳蚀病病原菌Pseudomonas aeruginosa GX2021的分离鉴定、致病机制及快速检测技术开发

针对养殖中华圆田螺(Bellamya aeruginosa)频发的壳蚀病问题，广西科研团队通过病原分离、16S rRNA测序和动物攻毒实验，首次证实铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)GX2021株为致病菌，建立基于dnaA基因的PCR快速检测技术，为水产病害防控提供新策略。

　　

在广西柳州的多处养殖场，一种被称为"壳蚀病"的神秘疾病正威胁着中华圆田螺(Bellamya aeruginosa)的生存。这种淡水螺不仅是生态系统中重要的清道夫，更因其高营养价值成为餐饮和医药行业的新宠。然而自2019年起，患病螺体出现外壳剥落、表面蓝绿变色等症状，严重时外壳薄如蝉翼，直接导致商品价值丧失。尽管重金属污染、微塑料暴露等环境因素曾被怀疑，但真正的致病元凶始终成谜。

广西科研团队从永乐镇和东泉镇的患病螺体中分离到优势菌株GX2021。通过经典的柯赫法则验证，研究人员首先观察到该菌在培养基上形成特征性的蓝绿色菌落，经16S rRNA基因测序显示与铜绿假单胞菌(P. aeruginosa)标准株ATCC 27853相似度高达98.25%，平均核苷酸一致性(ANI)分析也证实其符合该菌种鉴定标准。动物攻毒实验再现了自然发病症状，首次确立该菌与壳蚀病的因果关系。

为建立快速诊断方法，团队针对GX2021株的dnaA基因(染色体复制起始调控基因)设计特异性引物，开发出灵敏度达10³
CFU/mL的PCR检测体系。药敏试验发现该菌对头孢曲松钠高度敏感，为临床用药提供依据。这些发现不仅填补了淡水螺病原学研究空白，更创新性地将分子检测技术引入水产病害监测领域。

主要技术方法包括：从广西柳州两个养殖场采集典型病例；通过传统分离培养和16S rRNA基因测序进行病原鉴定；采用回归感染实验验证致病性；基于dnaA基因序列设计特异性引物建立PCR检测；通过纸片扩散法进行抗生素敏感性测试。

【Sampling】
研究团队在2021年11月采集了具有典型壳蚀症状的螺体，病变更表现为外壳钙质层暴露和蓝绿色变色，严重个体出现外壳脆化。

【Molecular identification by 16S rRNA assay】
16S rRNA基因测序显示112bp片段与P. aeruginosa高度同源，系统发育树分析确认GX2021株位于铜绿假单胞菌分支。

【Discussion】
研究揭示了螺壳不仅具有防御功能，其完整性与免疫状态密切相关。壳蚀病的爆发与养殖密度增加导致的病原传播有关，而快速检测技术的建立实现了早期预警。

【Conclusion】
该研究首次证实P. aeruginosa GX2021是壳蚀病的病原体，建立的dnaA-PCR检测方法为养殖场病原监测提供利器。研究成果对保障水产品质量安全、推动生态养殖具有重要意义，相关技术已具备推广应用价值。

论文发表于《Journal of Invertebrate Pathology》，通讯作者为柳州市水产技术推广站的Yanhe Li团队。该工作获得广西"双百"稻虾生态养殖科技创新与产业化示范等项目支持，体现了产学研结合的特色。值得注意的是，研究不仅解决了实际问题，还为无脊椎动物病原学研究提供了新模型，其技术路线可推广至其他水产病害防控领域。